【摘 要】
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MGF(Mechano-growth factor)是一种IGF-1变体形式,研究发现该因子具有应力敏感性,并且具有促进肌肉肥大,再生以及神经损伤修复的功能.通过RT-PCR从拉伸刺激的人成骨细胞中克
【机 构】
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重庆大学生物工程学院,重庆,400030;重庆大学国家985工程生物材料与仿生工程研究中心,重庆,400030;
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MGF(Mechano-growth factor)是一种IGF-1变体形式,研究发现该因子具有应力敏感性,并且具有促进肌肉肥大,再生以及神经损伤修复的功能.通过RT-PCR从拉伸刺激的人成骨细胞中克隆MGF cDNA序列.并去除5端9 bp的序列.使N端缺少对肠激酶(Enterokinase,EK)具有抑制作用的脯氨酸,将截短型MGF(des(1-3)MGF)cDNA序列克隆入pET32a(+))质粒,构建重组表达质粒.重组质粒转化E. coli BL21(DE3),在30℃培养下以可溶形式表达融合蛋白Trx/des(1-3)MGE采用离子交换层析和Ni2+金属亲和层析,获得纯度95%以上的融合蛋白.再对融合蛋白EK酶切,rpHPLC分离获得纯度达98%的des(1-3)MGE SDS-PAGE及质谱分析蛋白分子量与理论值相符.生物活性实验显示.所制备的des(1-3)MGF比des(1-3)IGF-1更显著的促进MC3T3-El细胞的增值和迁移.
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