【摘 要】
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目的①建立并优化测定血小板再表达膜表面激活标志物CD62p能力的流式细胞术(FCM);②测定22℃保存液体血小板不同保存期再表达CD62p的能力,以评价该指标在血小板质量监测以及
【机 构】
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解放军总医院,北京,100853College,of,Medicine,in,University,of,Kentucky,Lexington,Ken.USA;
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目的①建立并优化测定血小板再表达膜表面激活标志物CD62p能力的流式细胞术(FCM);②测定22℃保存液体血小板不同保存期再表达CD62p的能力,以评价该指标在血小板质量监测以及新的保存方法研究中的应用价值.方法①采用浓度梯度法优化GPRP浓度条件,采用析因设计优化凝血酶浓度和37℃孵育时间条件,寻找最佳阴、阳性对照;②将13份血小板按AABB标准保存,并延长保存至12d,测定每天血小板CD62p再表达率,与其相应体内存活期作直线相关性分析.结果①约1.5×106个血小板内加入2.5mmol/L GPRP可有效防止过量凝血酶诱导的聚集反应,孵育条件以1U/L凝血酶37℃15min然后室温置15min最佳.采用新鲜富含血小板血浆(FPRP)为阴性对照,以凝血酶激活FPRP为阳性对照效果良好.②22℃保存血小板CD62p再表达率与其相应体内存活期呈明显正相关,单份相关系数(r)0.91～0.99,总体相关系数为0.99.结论①优化建立了一种灵敏简便,稳定性和重复性并好的流式细胞术方法用于测定保存血小板CD62p再表达率;②保存液体血小板CD62p再表达率与其相应体内存活期呈明显正相关,且相关性良好,提示CD62p再表达率是监测保存血小板质量的良好指标,同时还可能在新的保存方法研究和临床血小板功能受损程度的检测中有良好的应用前景.
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