根据已发表的弓形虫微线体蛋白4(MIC4)序列进行生物信息学分析并设计引物扩增RH株中的目的基因,将扩增产物链接到pET-28a(+)载体并转化大肠杆菌感受态细胞进行诱导表达,用纯化后去除内毒素的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,通过监测抗体水平、Western blot和激光共聚焦方法鉴定其免疫原性并初步分析其生物学功能。结果显示,mic4基因ORF编码580个氨基酸残基,去除信号肽(25个氨基酸残基)后的PCR产物长度为1 686 bp,重组蛋白的理论相对分子质量为63 830,与其他物种的同源性较低,在pH7.5和IPTG浓度为0.5 mmol/L时18℃培养可溶性表达,血液中的抗体水平随着免疫次数的增加而升高,3免之后抗体滴度达到1∶8 000以上,抗体可以识别排泄分泌抗原(ESA)中的MIC4,MIC4主要位于速殖子前部的细胞质和膜表面。结果表明,重组MIC4是ESA的成分并且分泌之前分布于虫体前部,具有良好的特异性和免疫原性。