【摘 要】
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用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6 cDNA片段插入pGEX-1λT质粒,转化大肠杆菌,以BamH I和Pst I酶切鉴定重组子,以IPTG诱导融合蛋白表达,并作RT-PCR及SDS-PAGE分析表达情况,从聚
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用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6 cDNA片段插入pGEX-1λT质粒,转化大肠杆菌,以BamH I和Pst I酶切鉴定重组子,以IPTG诱导融合蛋白表达,并作RT-PCR及SDS-PAGE分析表达情况,从聚丙烯酰胺制备凝胶中回收融合蛋白,用MTT法测定重组蛋白刺激小鼠脾淋巴母细胞增殖反应的活性,并免疫家兔制备高免血清,得到高效表达猪IL-6的质粒pGPIL-6, RT-PCR确证pGPIL-6在大肠杆菌中能正确转录,经SDS-PAGE分析表达蛋白分子量为49kD,融合蛋白具有较高的促小鼠淋巴细胞增殖反应活性,以此免疫家兔,可制备滴度为1∶128 000的兔高免血清.
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