转mgfp-5基因烟草的愈伤诱导及培养

来源 :基因组学与应用生物学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wmhgm
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海洋软体动物贻贝(Mytilidae)足丝腺分泌的贻贝粘蛋白(mussel adhesive protein,MAP)即贻贝足丝蛋白(mussel foot protein,Mfp),不仅有水中高粘性及耐腐蚀性,而且无毒、无免疫原性,生物相容性好,其中Mfp-5粘性最强。现用的贻贝粘蛋白主要是天然获取,但是其含量低易固化难获得,基因工程重组贻贝粘蛋白的研究刚刚开始。前期我们在烟草中表达了地中海贻贝蛋白(mytilus galloprovincialis foot protein type 5,Mgfp-5)基因,得到转mgfp-5基因烟草种子。本实验将转基因T1代种子无菌苗进行愈伤组织诱导,在附加不同浓度的2,4-D、6-BA、NAA的MS培养基上,诱导率≥90.0%,其中2,4-D 1.0 mg/L、6-BA 0.5 mg/L、NAA 0.1 mg/L时诱导率为100%;愈伤组织固/液培养过程中均以"S"型曲线生长,固体培养时12~27 d鲜质量增长率为3.73%,液体培养时间缩短6 d,在6~15 d时间内鲜质量会增加8.56~8.63倍;固/液培养的继代愈伤组织,PCR、RT-PCR及Western blotting分别检测到预期大小的电泳条带,显示了外源mgfp-5基因及Mgfp-5蛋白稳定表达。稳定表达Mgfp-5蛋白的愈伤组织,可以为获得重组蛋白Mgfp-5的原材料提供新途径,为研究植物表达贻贝粘蛋白提供参考。
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