【摘 要】
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运用RT-PCR和RACE-PCR技术克隆了翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)铜锌超氧化物歧化酶(命名为ScCu/Zn-SOD)基因,该基因的cDNA序列全长为804 bp,开放阅读框为465 bp,编码154个氨基酸
【机 构】
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南昌大学生命科学学院,南昌市农科院畜牧水产研究所,江西生物科技职业学院
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运用RT-PCR和RACE-PCR技术克隆了翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)铜锌超氧化物歧化酶(命名为ScCu/Zn-SOD)基因,该基因的cDNA序列全长为804 bp,开放阅读框为465 bp,编码154个氨基酸.氨基酸序列中含2个Cu/Zn-SOD标签序列、7个铜锌金属结合位点、2个半胱氨酸位点和1个N-糖基化位点;其与胞内Cu/Zn-SOD(icCu/Zn-SOD)和胞外Cu/Zn-SOD (ecCu/Zn-SOD)氨基酸序列的同源性分别为60.13％～92.21％和33.77％～42.21％.在系统进化树中,ScCu/Zn-SOD与其它物种的icCu/Zn-SOD聚成一支.ScCu/Zn-SOD的蛋白晶体结构主要由2个α螺旋和8个β折叠组成,呈β折叠构象,通过结合1个Cu2+和1个Zn2+构成其酶活性中心.ScCu/Zn-SOD的mRNA在翘嘴鳜肌肉、鳃、肝脏和肾脏等组织中均有表达,且鳃中的相对表达量最高.将该基因编码蛋白序列与pET-30a表达载体重组,热激转人大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞中诱导表达,SDS-PAGE检测发现诱导后菌液的超声上清中有可溶性重组蛋白表达.
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