不同转染方式介导基因转染效果的评价

来源 :中华超声影像学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:giaobiao123
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目的 评价不同转染方式介导基因转染的效果.方法 将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因转染至293T细胞中.根据转染方式不同分为6组:对照组、单纯质粒组(eGFP)、微泡+质粒组(MB+eGFP)、辐照+质粒组(US+ eGFP)、超声辐照+微泡+质粒组(UTMD+ eGFP)、脂质体+质粒组(Lip2000+eGFP).超声辐照条件为2.0 W/cm2、45 s、1 MHz、20%占空比,eGFP质粒浓度为1 mg/ml.将293T细胞种植于24孔板内,细胞密度1.5×105/孔,24 h后进行转染.转染72 h荧光显微镜下观察细胞内绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪检测荧光细胞比例,CCK-8检测细胞存活率,计算转染效率(=荧光细胞比例×细胞存活率);westem bloting检测eGFP蛋白表达水平.结果 转染后72 h,UTMD+ eGFP组和Lip2000+eGFP组荧光细胞表达较多.各组的转染效率分别为:0%(对照组)、0%(eGFP组)、0%(MB+ eGFP组)、1.9%(US+ eGFP组)、33.8%(UTMD+ eGFP组)、74.8%(Lip2000+ eGFP组).Western显示eGFP在UTMD+ eGFP组和Lip2000+ eGFP组显著表达,其余各组无明显表达.结论 超声靶向微泡破灭和脂质体转染均能有效促进基因转染。

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