【摘 要】
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目的 研究长链非编码(lncRNA)PWAR5在脂多糖诱导心肌炎时对心肌细胞的保护作用及分子机制.方法 分离培养大鼠原代心肌细胞,分别采用载有PWAR5序列的慢病毒(PWAR5组)和空载慢病毒(Control组)进行感染,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测感染效率.采用脂多糖诱导心肌炎后,MTS法检测PWAR5对大鼠原代心肌细胞活力的影响,ELISA法检测上清液中白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量,流式细胞术分别检测PWAR5对大鼠原代心肌细胞凋亡的影响.分别采用生物信息学方
【机 构】
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青岛大学附属青岛市海慈医院心内科,青岛 266000
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目的 研究长链非编码(lncRNA)PWAR5在脂多糖诱导心肌炎时对心肌细胞的保护作用及分子机制.方法 分离培养大鼠原代心肌细胞,分别采用载有PWAR5序列的慢病毒(PWAR5组)和空载慢病毒(Control组)进行感染,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测感染效率.采用脂多糖诱导心肌炎后,MTS法检测PWAR5对大鼠原代心肌细胞活力的影响,ELISA法检测上清液中白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量,流式细胞术分别检测PWAR5对大鼠原代心肌细胞凋亡的影响.分别采用生物信息学方法和双荧光素酶报告基因实验预测和验证PWAR5的靶基因.qRT-PCR检测靶基因的表达.Western blot法检测靶基因蛋白及凋亡相关蛋白的表达.结果 与Control组相比,PWAR5组细胞中PWAR5表达增加(P<0.01).脂多糖处理后,与Control组相比,PWAR5组细胞活力增加(P<0.01),上清液中IL-1β和TNF-α的含量下降(均P<0.01),PWAR5组细胞凋亡比例下降(P<0.01).PWAR5的靶基因可能是miR-30a-5p,PWAR5可与miR-30a-5p互补结合(P<0.01).与Control组相比,PWAR5组细胞中miR-30a-5p的表达下降(P<0.01),细胞因子信号传导抑制因子3(SOCS3)mRNA的表达增加(P<0.01).与Control组相比,PWAR5组细胞中SOCS3和Bcl-2蛋白表达上升,Bax和Caspase-3蛋白表达下降.结论 PWAR5可通过靶向调控miR-30a-5p/SOCS3分子轴,降低心肌炎导致的心肌细胞损伤.
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