【摘 要】
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根据GenBank数据库K亚群禽白血病病毒(Subgroup K avian leukosis virus,ALV-K)特异性抗原gp85的基因序列,设计一组ALV-K特异性的引物和探针,并构建阳性重组质粒。在对反应体
【机 构】
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珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心; 华南农业大学兽医学院; 广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(31672552);题目:禽白血病病毒新亚群受体的解析及其介导的分子感染机制;广东省自然科学基金(2016A030313403);题目:新出现K亚群禽白血病病毒的病原学研究;国家肉鸡产业技术体系岗位科学家(CARS-41-G16);岗位名称:生物安全与综合防控岗;广东省现代农业产业技术体系创新团队项目(2016LM1114);团队名称:广东省家禽产业技术体系创新团队;珠海出入
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根据GenBank数据库K亚群禽白血病病毒(Subgroup K avian leukosis virus,ALV-K)特异性抗原gp85的基因序列,设计一组ALV-K特异性的引物和探针,并构建阳性重组质粒。在对反应体系进行优化的基础上,建立了ALV-K的实时荧光RT-PCR检测方法并进行了特异性试验、敏感性试验和重复性试验。结果显示,本方法能对ALV-K进行特异性扩增,而对A亚群、B亚群、J亚群、E亚群禽白血病毒和新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、禽网状内皮组织增生病病毒(REV)、禽流感病毒(AIV)等禽病病原未见扩增。该方法最低能够检测到3.4×101拷贝数/μL的阳性质粒,灵敏度是RT-PCR的100倍。应用本方法对人工攻毒ALV-K的SPF鸡各脏器进行病毒定量分析,结果显示,在攻毒鸡体内心、肝、脾、肺、肾等脏器中均能检测到ALV-K,且肝、肾和脾中的病毒含量显著高于心和肺(P<0.01)。
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