【摘 要】
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目的:克隆人肥胖基因瘦素蛋白(leptin)编码区cDNA序列,并构建其原核表达载体。方法:在人体脂肪组织中提取mRNA,利用RTPCR扩增人肥胖基因,将其插入pMD18T载体,经双酶切、鉴定
【机 构】
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吉林大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室,吉林大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室,北华大学医学院病理生理学教研室,吉林省公安厅物证鉴定中心
【基金项目】
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国家自然科学基金资助课题(30370669)
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目的:克隆人肥胖基因瘦素蛋白(leptin)编码区cDNA序列,并构建其原核表达载体。方法:在人体脂肪组织中提取mRNA,利用RTPCR扩增人肥胖基因,将其插入pMD18T载体,经双酶切、鉴定后将肥胖基因片段亚克隆入pET28a表达载体,提取质粒。将阳性重组质粒转化表达受体菌E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导肥胖基因表达产物,以聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)检测产物蛋白。结果:经测序证实获得的肥胖基因序列与相关文献报道一致,其表达产物的相对分子质量约为20000。结论:利用pMD18T克隆载体和pET28a表达载体可以有效地在原核生物中表达重组人类瘦素蛋白。
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