视神经慢性损伤相关差异表达cDNA文库的鉴定与分析

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目的:对构建的猫视神经慢性损伤相关差异表达cDNA文库进行初步克隆、鉴定和分析。方法:用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行cDNA文库扩增和蓝白斑筛选,每个文库随机挑取300个白色克隆用菌落PCR进行鉴定。对阳性克隆菌落进行DNA测序以获得差异表达基因片段序列。将测序所得的序列通过互联网用Blast程序查找日本国家DNA数据库进行同源性分析。用实时定量PCR验证差异克隆。结果:PCR鉴定获得1000个阳性菌落,测序获得674个EST片段,序列长度在200~800bp之间。同源性分析结果提示4周正向文库得到14个
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