【摘 要】
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建立甲型H1N1流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法,通过优化IPTG浓度和诱导时间确定HA融合蛋白的最佳表达条件,并进行Western bloc和血凝试验鉴定.用纯化蛋白制备单克隆抗体,建
【机 构】
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河南工业大学,河南郑州450001 郑州职业技术学院,河南郑州450121;河南工业大学,河南郑州,450001;郑州大学河南郑州450001;河南省生物工程技术研究中心,河南郑州,450001;河南
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建立甲型H1N1流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法,通过优化IPTG浓度和诱导时间确定HA融合蛋白的最佳表达条件,并进行Western bloc和血凝试验鉴定.用纯化蛋白制备单克隆抗体,建立检测甲型H1N1流感病毒的双抗体夹心ELISA检测方法,对其交叉反应、符合率进行验证.结果表明,HA蛋白在BL21 (DE3)中得到表达,主要以包涵体的形式存在,分子质量为64 ku,最佳诱导条件为IPTG终浓度0.2 mmol/L,诱导时间4h.Western blot鉴定其与H1N1病毒有相同的抗原性,血凝试验表明无血凝活性.制备HA单抗并初步建立双抗体夹心ELISA检测方法,检测100份阳性PCR样本,符合率为96％.建立的夹心ELISA方法可用于H1N1亚型流感病毒的初步诊断.
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