【摘 要】
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背景:对于CD40通路的研究以往多集中在器官移植,涉及异体肢体方面的报道较少.目的:探讨靶向CD40的小分子RNA于扰对人鼠异体肢体移植急性排斥反应、细胞凋亡的影响,检测CD40通
【机 构】
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哈尔滨医科大学附属第一医院骨科,黑龙江省哈尔滨市,150001黑龙江中医药大学骨科,黑龙江省哈尔滨市150001;哈尔滨医科大学附属第一医院骨科,黑龙江省哈尔滨市,150001;黑龙江中医药大学骨科,
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背景:对于CD40通路的研究以往多集中在器官移植,涉及异体肢体方面的报道较少.目的:探讨靶向CD40的小分子RNA于扰对人鼠异体肢体移植急性排斥反应、细胞凋亡的影响,检测CD40通路阻滞后相关基因的表达变化.设计、时间及地点:细胞基因工程体内实验,于2007-09/2008-02在哈尔滨医科大学附属第一医院中心实验窜完成.材料:清洁级10～12周龄雄性Wistar受鼠、SD供鼠各27只,行同种异体右后肢移植.真核表达质粒pSilencer4.1-CMV neo 为Ambion公司产品.pSilencer4.1-CD40shRNA重组质粒由哈尔滨医科大学附属第一医院中心实验室保存.梭华-Sofast(TM) in vivo体内转染试剂为厦门太阳马生物工程有限公司产品.方法:27只Wistar受鼠异体肢体移植完成后随机分为3组,9只/组.干扰组经阴茎背静脉注入梭华-Sofast(15 μL)-siCD40-2/pSilencer(100 μ g)载体复合物600 μ L,空载体组等量注入梭华-Sofast(15 μ L)-pSilencer 4.1-CMV neo(100 μ g)空载体复合物,对照组等量注入生理盐水,连续注射6 d,1次/d.主要观察指标:观察移植物排斥反应征象及移植肢体存活时间,检测细胞凋亡情况,免疫组织化学染色检测p53,p21,Bcl-2,Bax的表达.结果:干扰组末见排斥反应征象,且移植物发生排斥反应的时间及存活时间均显著长于空载体组、对照组(t=3.137～3.519,P
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