【摘 要】
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以丝瓜基因组DNA为模板,对ISSR反应中主要5个影响因素Mg2+浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度和DNA模板浓度,建立丝瓜ISSR-PCR反应的体系。根据实验确定的最佳反应
【机 构】
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福建省农业科学院作物研究所; 福建省农业科学院蔬菜研究中心; 福建省蔬菜工程技术研究中心;
【基金项目】
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福建省属公益类科研院所基本科研专项(2017R1101028-6);福建省农业科学院创新团队PI项目(2016PI-40);福建省自然科学基金项目(2015J01118);福建省种业创新与产业化工程(FJZZZY-1528)共同资助
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以丝瓜基因组DNA为模板,对ISSR反应中主要5个影响因素Mg2+浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度和DNA模板浓度,建立丝瓜ISSR-PCR反应的体系。根据实验确定的最佳反应体系为:25μL ISSR体系:50 ng DNA,0.2 mmol/L dNTP,1 U Taq酶,0.4μmol/L的单条引物,2.5μL 10×Buffer,2.0 mmol/L Mg2+。在此基础上,对12个引物的退火温度进行优化。最终选用60份丝瓜品种对所确定的扩增体系及扩增程序进行验证,检测结果表现为扩增产物条带清晰明亮、亮度高和重复性好,表明本试验所确定的反应体系及反应程序适用于丝瓜的ISSR分子标记为丝瓜种质资源的鉴定、分类和丝瓜的杂交育种提供参考依据。
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