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目的
建立小鼠肠神经前体细胞体外培养和纯化的方法，寻找合适的肠神经前体细胞转染方式进行增殖分化等功能实验，为研究肠神经系统发育及疾病奠定基础。
方法取胎龄16.5 d(E16.5)的ICR小鼠胚胎肠道，经胶原酶消化后制成单细胞悬液，接种到神经前体细胞培养基中，多次换液后进行免疫学鉴定。纯度达到95%的神经前体细胞使用lipo2000，RNAimax，慢病毒等三种方式进行mmu-miR-346转染，通过实时荧光定量PCR检测神经前体细胞内mmu-miR-346的表达来比较这三种方式的转染效率。使用EdU法检测肠神经前体细胞的增殖情况，通过分化培养基诱导检测肠神经前体细胞的分化情况。
结果培养第2天出现神经球，经过4次全换液，免疫学鉴定显示(96.85±0.5357)%细胞为Nestin/p75双阳性。lipo2000，RNAimax，慢病毒这三种转染方式中仅慢病毒方法的转染效率最高，能显著提升mmu-miR-346表达水平(差异倍数：117.45)。EdU阳性率与TuJ1阳性率分别从阴性对照组的(17.87±1.13)%和(24.87±0.6)%降至转染组的(6.73±0.43)%与(11.90±0.85)%，两组在增殖与分化中的差异均具有统计学意义(P<0.0001；P<0.001)。
结论通过分离消化E16.5小鼠肠道可以建立小鼠肠神经前体细胞培养和纯化的方法，慢病毒方法在肠神经前体细胞的转染效率最高，能成功进行增殖与分化实验，可以为肠神经系统发育和疾病的研究奠定基础。