【摘 要】
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目的探讨PCR仪温度特性及变性温度、变性时间对实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒的影响。方法分析比较变性温度范围为88℃～97℃,变性时间分别为5s和40s,退火和延伸60℃,40s,循
【机 构】
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上海理工大学低温生物研究所,上海市安图医院
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目的探讨PCR仪温度特性及变性温度、变性时间对实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒的影响。方法分析比较变性温度范围为88℃～97℃,变性时间分别为5s和40s,退火和延伸60℃,40s,循环数40的实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒的效果。结果变性温度超过97℃或者变性时间超过40s,检测到的DNA的量明显降低;变性时间小于20s,模板含量较低的样本难以检出。结论变性初期或退火初期PCR温度与程序设置温度偏差较大;变性时间不应超过95℃,否则,检测到的DNA数量将显著降低;变性时间不应小于20s或超过40s
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