观察微小RNA(miRNA，miR)-83a表达对体外骨髓间充质干细胞(BMSC)的诱导分化和生物学功能的影响。
方法将实验分为3组：A组：PEF-miR-83a和PSV2neo共转染组；B组：未转染组；C组：PEF和PSV2neo共转染组。A组为实验组，B、C两组为对照组。按照说明书进行转染，加入400 μg PmlG419筛选，经3周后形成阳性克隆，扩增培养，应用基因转录方法检测miR-83a表达对体外BMSC的抗分化作用和生物学功能的影响；通过免疫组织化学法和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测miR-83a在细胞中的表达，Real-time PCR测定转染后A549细胞中Ras、Raf、蛋白激酶B(Akt)和细胞外信号调节激酶(ERK) mRNA水平表达变化，并通过噻唑蓝(MTT)法、划痕实验、苏木素-伊红(HE)染色、显微镜等观察比较转染miR-83a的细胞的的迁移能力，诱导分化和形态学改变。
结果Real-time PCR和免疫组织化学检查结果证实转染后细胞中miR-83a稳定表达；阿辛兰染色结果：培养第7天，诱导分化组细胞内充满了大量的棕色特异性染色颗粒，未诱导分化组未见特异性染色颗粒。Real-time PCR结果：A组细胞Ras、Raf、Akt mRNA相对表达量分别为0.97±0.27、0.54±0.18和0.99±0.31, B组细胞为1.79±0.36、1.70±0.33和2.06±0.42，C组细胞为1.68±0.30、1.58±0.25和1.89±0.31。和B、C组比较，A组细胞中Ras、Raf和Akt mRNA水平显著降低(t＝1.531、1.838，P＝0.016、0.011) 。MTT结果表明随着miR-83a与细胞效靶作用时间延长，抑制率明显增强，作用24、48、72 h后，细胞的凋亡率分别为(23.49±4.64)%、(45.73±8.72)%和(59.25±13.16)%，不同作用时间比较差异有统计学意义(χ2＝5.203、2.146，P＝0.013、0.045)。划痕实验结果显示：miR-83a转染的细胞迁移能力低于正常细胞。miR-83a作用于细胞24 h后，形态学观察细胞发生凋亡或坏死。
结论miR-83a转染对体外BMSC具有抑制分化和促进凋亡作用，它可能是通过抑制表皮生长因子受体(EGFR)和EGFRvⅢ信号传导通路中的RAS-RAF-丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷酸肌醇3激酶(PI3K)-Akt两条重要信号通路分子的活性来发挥作用。