【摘 要】
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目的 比较腺病毒、脂质体、纳米材料三种不同类型的载体体外携带目的 基因Math1对HEK293T细胞的转染效率及细胞毒性的大小,以期筛选理想的基因转染载体材料.方法 选用重组腺
【机 构】
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解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,兰州大学第一附属医院耳鼻咽喉科
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目的 比较腺病毒、脂质体、纳米材料三种不同类型的载体体外携带目的 基因Math1对HEK293T细胞的转染效率及细胞毒性的大小,以期筛选理想的基因转染载体材料.方法 选用重组腺病毒、LipofectamineTM 2000、Superfect纳米材料作为转染载体,携带含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因的Math1-EGFP基因及真核表达质粒pRK5-Math1-EGFP,并且根据不同转染载体说明步骤优化体外转染条件,分别转染293T细胞.在一定的时间内利用荧光显微镜观察细胞转染结果并计数阳性细胞,采用MTT(噻唑蓝)法检测三种不同载体体外细胞毒性,应用RT-PCR(逆转录聚合酶链反应)技术检测转染阳性细胞中目的 基因Math1的mRNA表达情况.结果 在优化的体外转染条件下,重组腺病毒载体介导的细胞转染率达到了94％以上,脂质体和商品化Supeffect纳米材料转染的细胞中,荧光蛋白表达率分别为73％和80％以上,同时,商品化Superfect纳米材料在达到80％转染率的条件下,细胞存活率为90％.应用RT-PCR方法 证实,三种载体转染细胞均有Math1基因的mRNA的表达.结论 商品化Supeffect纳米材料作为一种新型的、安全有效的纳米转染材料,能够成功携带耳聋治疗关键基因Math1转染293T细胞,以期在内耳基因治疗的研究当中得到有效的应用.
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