利用慢病毒载体构建稳定干扰AMPKα1的HeLa细胞系

来源 :海南医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户：hwwacm

【摘要】

：

目的建立稳定干扰AMPKα1的He La细胞系。方法利用AMPKα1慢病毒干扰质粒PLKO.1-puro-AMPKα1转染293T细胞制备重组慢病毒,然后用重组慢病毒感染He La细胞,荧光显微镜观察病

【作者】

：

李树朋陈浩林晓莹林广宏赵斌钟望涛李文

【机构】

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广东医科大学,广东医科大学附属医院神经病学研究所广东省衰老相关心脑疾病重点实验室,广东医科大学附属医院神经内科

【出处】

：

海南医学

【发表日期】

：

2017年23期

【关键词】

：

慢病毒载体 AMPKα1 RNA干扰 Hela细胞 Metformin

【基金项目】

：

国家自然科学基金(编号:31401182);广东省自然科学基金(编号:2014A030313533);广东省科技发展专项资金(编号:2016A020215152);广东省粤东西北地区引进紧缺拔尖人才“扬帆计划”人才项目(编号:4YF14007G);广东医科大学科研基金(编号:M2014024,M2015001)

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目的建立稳定干扰AMPKα1的He La细胞系。方法利用AMPKα1慢病毒干扰质粒PLKO.1-puro-AMPKα1转染293T细胞制备重组慢病毒,然后用重组慢病毒感染He La细胞,荧光显微镜观察病毒感染效率,免疫印迹实验检测Sh-AMPKα1病毒感染组的AMPKα1表达。然后采用嘌呤霉素筛选出稳定干扰AMPKα1的He La细胞单克隆,免疫印迹实验和免疫荧光实验检测AMPKα1表达情况。最后用AMPK激活剂Metformin实验验证AMPKα1稳定干扰的Hela细胞中AMPKα1蛋白的表达以及AMP

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