采用正交试验设计优化了油茶籽种仁中2个主要黄酮苷山奈酚-3-O-{β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷}(Ⅰ)和山奈酚-3-O-{β-D-吡喃木糖基-(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷}(Ⅱ)的提取工艺;采用Venusil MP C18色谱柱,乙腈-0.1%磷酸水溶液流动相,线性梯度洗脱,流速1.0 m L/min,检测波长220 nm,柱温25℃,建立了2个主要黄酮苷的HPLC含量测定方法。结果表明以80%甲醇按照料液比1∶50(g/m L)在80℃条件下回流提取60 min,2个黄酮苷的得率最高,11个品种油茶籽种仁中黄酮苷Ⅰ质量分数为1.28%~2.98%,黄酮苷Ⅱ质量分数为1.42%~2.37%。该含量测定方法专属性强、准确度高、重复性好,可用于测定不同品种油茶籽种仁中主要黄酮苷的含量。