【摘 要】
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目的 原核表达、纯化腺相关病毒9（adeno-associated virus 9,AAV9）衣壳可变区蛋白，并制备针对AAV9衣壳可变区的兔多克隆抗体。方法 设计并合成编码AAV9衣壳蛋白可变区的DNA序列，插入原核表达载体pET-30a获得质粒pET-30a-AAV-VR，转化E. coli BL21（DE3）,IPTG诱导表达多价抗原肽，在变性条件下经Ni-NTA树脂纯化，透析复性后将AAV
【基金项目】
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湖北省教育厅中青年人才项目（Q20211207）； 湖北省老年胃肠癌精准防治临床医学研究中心开放基金（2022EGC-05）；
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目的 原核表达、纯化腺相关病毒9（adeno-associated virus 9,AAV9）衣壳可变区蛋白，并制备针对AAV9衣壳可变区的兔多克隆抗体。方法 设计并合成编码AAV9衣壳蛋白可变区的DNA序列，插入原核表达载体pET-30a获得质粒pET-30a-AAV-VR，转化E. coli BL21（DE3）,IPTG诱导表达多价抗原肽，在变性条件下经Ni-NTA树脂纯化，透析复性后将AAV9可变区蛋白免疫雄性日本大耳白兔，制备多克隆抗体，间接ELISA法检测抗体效价，Western blot及细胞免疫荧光法检测抗体的特异性。结果 表达AAV9衣壳可变区蛋白的重组原核表达质粒pET-30a-AAV-VR经XhoⅠ和BglⅡ双酶切鉴定构建正确。表达的蛋白相对分子质量约为20 000，纯化后可被His标签抗体识别。制备的兔多克隆抗体效价为1∶10 240 000，能特异性识别AAV9衣壳蛋白。结论 成功表达了AAV9衣壳可变区蛋白，并制备了高效价的兔多克隆抗体，为后续AAV载体开发以及AAV生物学功能研究奠定了基础。
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