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肺癌是多步骤多基因参与的分子事件,涉及多个癌基因的激活和抑癌基因的失活,支气管镜活检病理难以显示肿瘤发展情况｡流式细胞术是一种对悬液中的单个细胞进行快速测量并自动分析的高技术,在肿瘤研究方面已成为重要的手段之一,目前,我们应用流式细胞术研究肺癌发展趋向及生物学特征取得了很好的效果,现报告如下:
1 材料与方法
1.1 一般资料选自2007年1月~2008年3月在吉林市第二人民医院经手术病理证实的肺癌患者38例,男性20例,女性18例,年龄32~72岁｡1.2 流式细胞术检测方法采用美国BeckmanCoulter XL型流式细胞仪先进行单细胞悬液制备然后进行细胞DNA染色,并行流式细胞仪检测,进行数据采集及DNA倍体分析并结合相应病理学检查结果进行统计学分析｡
1.3 DNA倍体的判断标准DI=0.9-1.1二倍体;DI=0.85-0.90或1.1-1.15为近二倍体;DI>1.15为超二倍体;DI=1.90-2.10为四倍体;近二倍体和超二倍体均为异倍体｡细胞周期分析的判定方法:PI=(S+G2M) /(G1/G0+S+G2M)｡PI值>20%说明细胞增殖旺盛｡应用SPSS 12.0进行统计处理｡对试验所得的不同资料,分别采用了X2检验及方差分析,检验水准α=0.05｡
2 结果
通过对癌组织､癌旁组织及癌旁1､2cm组织与正常组织进行DNA倍体分析: 异倍体在癌组织､癌边缘组织与癌旁1cm组织中出现阳性率差别有统计学意义,癌旁1cm与癌旁2cm组织出现阳性率差别也有统计学意义,癌中心与癌边缘组织出现阳性率统计学上无差别,癌旁2cm组织与正常组织中出现阳性率无统计差别,见表1｡肿瘤细胞的调节和生长控制系统出现障碍可能与染色体结构和DNA含量异常改变有关,主要表现为异倍体的出现,如何早期发现与诊断肺癌是肿瘤工作者研究的焦点,流式细胞术为此提供了新的研究手段｡分析DNA倍体与细胞周期时,将DNA含量分为3部分G0/G1､S､G2/M期3个细胞峰｡肿瘤发生时, 肿瘤内DNA合成是无序的,此时DNA倍体分析可出现DNA异倍体细胞｡一般认为,S期百分率(SPF)>15%或S期%+G2期%(PI)>20%,也说明细胞存在恶性增殖情况犤1犦｡本研究结果表明从正常组织､癌旁组织到肺癌组织DI值逐渐升高,各组之间有显著性差异,且DNA异倍体与分化程度､TNM分期有关分化程度越差､TNM分期越高异倍体比例越大,异倍体的比例与性别､年龄､组织类型无关｡说明了DNA含量反映了其肿瘤的生物学行为,异倍体比率反映了其恶性程度,因此文献报道其可以作为预后的标志犤2犦｡由此可见流式细胞术从细胞动力学角度研究细胞的增值活动与癌变,提供了快速有效地研究手段｡本组实验中38例癌中心组织中33例出现异倍体,出现率86.8%｡癌边缘有异倍体31例,出现率81.6%｡癌旁1cm组织中38例为异倍体,出现率42.1%｡癌旁2cm组织中有2例为异倍体,出现率5.26%｡正常组织无异倍体,细胞周期正常｡癌中心组织､癌边缘组织异倍体出现率无差别｡癌边缘组织与癌旁1cm组织异倍体出现率有差别｡癌旁1cm组织异倍体出现率明显高于癌旁2cm组织(P<0.01)｡癌旁2cm组织与正常组织DNA异倍体出现率无统计上差异｡在2倍体中癌边缘与癌旁1cm组织的PI值(S期%+G2期%)无差异,但癌旁1cm组织与癌旁2cm组织中PI值(S期%+G2期%)差异显著(P<0.01),而癌旁2cm组织与正常组织的PI值(S期%+G2期%)比较无显著差异｡此说明肺癌中心组织与癌边缘组织都是癌组织､与癌旁1cm组织均具有恶性增殖生物学行为｡肺癌与DNA异倍体有显著关系,该结果同李玉皓犤3犦等报道的一致｡对于形态可诊断癌前病变的组织,有必要进行细胞周期检测和DNA倍体分析,如果出现DNA非整倍体,应密切随访,及早发现癌变｡有研究显示通过流式细胞术进行DNA倍体分析,出现异倍体的以及细胞周期异常的在病理上難以确定癌变的组织具有癌一样的生物学行为并最终发展成癌｡通过本研究表明癌旁组织(距癌缘1CM) 具有恶性增殖行为, 而距癌边缘2cm的癌旁组织其恶性增殖行为不明显,距癌边缘2cm与周围正常组织DNA倍体分析及细胞周期分析结果无统计学差别｡能否说切除距癌边缘2cm以上则为根治切除范围,此仍需进一步研究,在癌旁2cm组织中仍出现3例异倍体,且其余2倍体中仍有12.3%为恶性增殖倾向｡而距癌边缘7cm以上的相对正常组织,其恶性增殖倾向很小｡为此,根据DNA倍体分析可以为我们手术治疗确定切除范围提供生物学的参考｡
参考文献
[1]陈娟,张锦.流式细胞术DNA含量分析对肺癌诊断的价值犤J犦中国肺癌杂志,2003,6(05):360~363
[2]师恩,江晓菁,李玉等.原发性肺癌DNA含量的检测及其意义犤J犦中国医科大学学报,2001,30(01):41~43
[3]李玉皓,王新允,张乃鑫等.非小细胞肺癌DNA含量和细胞凋亡的相关性研究犤J犦中国肿瘤临床,2000,27(08):578~581
注:检验水准:α=0.05;① 与② 比较χ2=0.92 P>0.05;② 与③比较χ2=21.32 P<0.01;③与④比较χ2=26.52 P<0.01;④与⑤比较χ2=3.06 P>0.05.
(收稿日期:2008.2.)
1 材料与方法
1.1 一般资料选自2007年1月~2008年3月在吉林市第二人民医院经手术病理证实的肺癌患者38例,男性20例,女性18例,年龄32~72岁｡1.2 流式细胞术检测方法采用美国BeckmanCoulter XL型流式细胞仪先进行单细胞悬液制备然后进行细胞DNA染色,并行流式细胞仪检测,进行数据采集及DNA倍体分析并结合相应病理学检查结果进行统计学分析｡
1.3 DNA倍体的判断标准DI=0.9-1.1二倍体;DI=0.85-0.90或1.1-1.15为近二倍体;DI>1.15为超二倍体;DI=1.90-2.10为四倍体;近二倍体和超二倍体均为异倍体｡细胞周期分析的判定方法:PI=(S+G2M) /(G1/G0+S+G2M)｡PI值>20%说明细胞增殖旺盛｡应用SPSS 12.0进行统计处理｡对试验所得的不同资料,分别采用了X2检验及方差分析,检验水准α=0.05｡
2 结果
通过对癌组织､癌旁组织及癌旁1､2cm组织与正常组织进行DNA倍体分析: 异倍体在癌组织､癌边缘组织与癌旁1cm组织中出现阳性率差别有统计学意义,癌旁1cm与癌旁2cm组织出现阳性率差别也有统计学意义,癌中心与癌边缘组织出现阳性率统计学上无差别,癌旁2cm组织与正常组织中出现阳性率无统计差别,见表1｡肿瘤细胞的调节和生长控制系统出现障碍可能与染色体结构和DNA含量异常改变有关,主要表现为异倍体的出现,如何早期发现与诊断肺癌是肿瘤工作者研究的焦点,流式细胞术为此提供了新的研究手段｡分析DNA倍体与细胞周期时,将DNA含量分为3部分G0/G1､S､G2/M期3个细胞峰｡肿瘤发生时, 肿瘤内DNA合成是无序的,此时DNA倍体分析可出现DNA异倍体细胞｡一般认为,S期百分率(SPF)>15%或S期%+G2期%(PI)>20%,也说明细胞存在恶性增殖情况犤1犦｡本研究结果表明从正常组织､癌旁组织到肺癌组织DI值逐渐升高,各组之间有显著性差异,且DNA异倍体与分化程度､TNM分期有关分化程度越差､TNM分期越高异倍体比例越大,异倍体的比例与性别､年龄､组织类型无关｡说明了DNA含量反映了其肿瘤的生物学行为,异倍体比率反映了其恶性程度,因此文献报道其可以作为预后的标志犤2犦｡由此可见流式细胞术从细胞动力学角度研究细胞的增值活动与癌变,提供了快速有效地研究手段｡本组实验中38例癌中心组织中33例出现异倍体,出现率86.8%｡癌边缘有异倍体31例,出现率81.6%｡癌旁1cm组织中38例为异倍体,出现率42.1%｡癌旁2cm组织中有2例为异倍体,出现率5.26%｡正常组织无异倍体,细胞周期正常｡癌中心组织､癌边缘组织异倍体出现率无差别｡癌边缘组织与癌旁1cm组织异倍体出现率有差别｡癌旁1cm组织异倍体出现率明显高于癌旁2cm组织(P<0.01)｡癌旁2cm组织与正常组织DNA异倍体出现率无统计上差异｡在2倍体中癌边缘与癌旁1cm组织的PI值(S期%+G2期%)无差异,但癌旁1cm组织与癌旁2cm组织中PI值(S期%+G2期%)差异显著(P<0.01),而癌旁2cm组织与正常组织的PI值(S期%+G2期%)比较无显著差异｡此说明肺癌中心组织与癌边缘组织都是癌组织､与癌旁1cm组织均具有恶性增殖生物学行为｡肺癌与DNA异倍体有显著关系,该结果同李玉皓犤3犦等报道的一致｡对于形态可诊断癌前病变的组织,有必要进行细胞周期检测和DNA倍体分析,如果出现DNA非整倍体,应密切随访,及早发现癌变｡有研究显示通过流式细胞术进行DNA倍体分析,出现异倍体的以及细胞周期异常的在病理上難以确定癌变的组织具有癌一样的生物学行为并最终发展成癌｡通过本研究表明癌旁组织(距癌缘1CM) 具有恶性增殖行为, 而距癌边缘2cm的癌旁组织其恶性增殖行为不明显,距癌边缘2cm与周围正常组织DNA倍体分析及细胞周期分析结果无统计学差别｡能否说切除距癌边缘2cm以上则为根治切除范围,此仍需进一步研究,在癌旁2cm组织中仍出现3例异倍体,且其余2倍体中仍有12.3%为恶性增殖倾向｡而距癌边缘7cm以上的相对正常组织,其恶性增殖倾向很小｡为此,根据DNA倍体分析可以为我们手术治疗确定切除范围提供生物学的参考｡
参考文献
[1]陈娟,张锦.流式细胞术DNA含量分析对肺癌诊断的价值犤J犦中国肺癌杂志,2003,6(05):360~363
[2]师恩,江晓菁,李玉等.原发性肺癌DNA含量的检测及其意义犤J犦中国医科大学学报,2001,30(01):41~43
[3]李玉皓,王新允,张乃鑫等.非小细胞肺癌DNA含量和细胞凋亡的相关性研究犤J犦中国肿瘤临床,2000,27(08):578~581
注:检验水准:α=0.05;① 与② 比较χ2=0.92 P>0.05;② 与③比较χ2=21.32 P<0.01;③与④比较χ2=26.52 P<0.01;④与⑤比较χ2=3.06 P>0.05.
(收稿日期:2008.2.)