【摘 要】
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为了构建表达猪圆环病毒2型（PCV-2）Cap蛋白和猪细小病毒1型（PPV-1）VP2蛋白的重组伪狂犬病病毒（PRV）及鉴定其免疫原性,试验采用经典同源重组技术构建重组病毒,利用密码子优化的VP2基
【基金项目】
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国家重点研发计划项目(2017YFD0500600;2017YFD0501600;2017YFD0500903);黑龙江省自然科学基金项目(C2015064)
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为了构建表达猪圆环病毒2型（PCV-2）Cap蛋白和猪细小病毒1型（PPV-1）VP2蛋白的重组伪狂犬病病毒（PRV）及鉴定其免疫原性,试验采用经典同源重组技术构建重组病毒,利用密码子优化的VP2基因(VP2opti)和含PRV gG蛋白信号肽序列的VP2opti基因分别构建重组质粒pMD18T-LR（TK）-VP2opti和pMD18T-LR（TK）-VP2opti（SP）。用已构建的重组病毒rPRV-TK-/gE-/gG-/3Cap+为骨架,以EGFP为标签经同源重组获得重组病毒。采用IPMA法鉴定Cap蛋白和VP2蛋白抗原在重组病毒感染的PK-15细胞中的表达,采用IFA法鉴定VP2蛋白在重组病毒感染的PK-15细胞中的表达与定位。用这2株重组病毒免疫小鼠,通过检测血清中PRV、PCV-2和PPV-1抗体水平对构建的重组病毒在小鼠体内的免疫原性进行评价。结果表明:经同源重组获得重组病毒rPRV-TK-/VP2+/gE-/gG-/2Cap+和rPRV-TK-/VP2+（SP）/gE-/gG-/2Cap+;在重组病毒感染的PK-15细胞中均能检测到阳性Cap蛋白和VP2蛋白抗原;重组病毒rPRV-TK-/VP2+/gE-/gG-/2Cap+表达的VP2蛋白定位于细胞浆和细胞核,而重组病毒rPRV-TK-/VP2+（SP）/gE-/gG-/2Cap+表达的VP2蛋白定位于细胞浆;用这2株重组病毒免疫小鼠能够检测到PRV中和抗体;用灭活的重组病毒免疫小鼠后可产生低水平的Cap和VP2抗体,而重组病毒活毒免疫的小鼠未检测到相应抗体。说明这2株重组病毒在体外能够表达Cap蛋白和VP2蛋白,PRV gG蛋白信号肽序列的加入促进了VP2蛋白从细胞核的释放。
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ue＊M＃’＃dkB4＃＃8＃”专利申请号:00109“7公开号:1278062申请日:00.06.23公开日:00.12.27申请人地址:（100084川C京市海淀区清华园申请人:清华大学发明人:隋森芳文摘:本发明属于生物技