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摘 要：目的：本文采用HPLC法对盐酸托烷司琼的含量进行了测定。方法：采用HPLC法时，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相为：甲醇-水-乙腈-三乙胺（700：200：100：2），检测波长为285nm。结果：盐酸托烷司琼药品浓度为1.13-124.39μg·ml-1的范围内有着良好的线性关系。结论：采用HPLC对盐酸托烷司琼的含量进行测定，有着良好的效果，将其应用在盐酸托烷司琼生产检测系统中，可以有效控制盐酸托烷司琼的质量。
关键词：HPLC法；测定；盐酸托烷司琼
盐酸托烷司琼是一种强效的抗结剂，其对放射治疗以及化疗中引起的恶心、呕吐症状有着良好的治疗效果。本文对HPLC法测定盐酸托烷司琼的含量进行了介绍与分析，还对这种方法的测定效果进行了验证，对色谱条件、线性范围以及有关物质的分离情况进行了分析，通过实践证明，这种测定方法测定的准确性较高，而且操作简单，重现性良好。
1 仪器与试药
1.1 仪器
仪器：SHIMADZU SPD-10AVP系统；紫外检侧器；色谱柱为ODSC18柱（4.6×250mm，5μm）。
1.2 试药
采用原料药精制技术制作了盐酸托烷司琼的对照品，将甲醇与乙腈作为色谱纯，将三乙胺作为分析纯，还采用了去离子水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：DiamonsilC18（4.6×250mm，5μm）；检测波长285nm；流动相：甲醇一水一乙睛一三乙胺（700：200：100：2）；流速：1.0ml/min；柱温：35℃。样品分离色谱图见图1。
图1 盐酸托烷司琼HPLC图
注：a.3-吲哚甲酸（已知杂质）；b.未知雜质；c.盐酸托烷司琼
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品配制。精密称取5mg对照品，将其置于100ml的量瓶中，然后加入流动相进行充分的溶解，稀释到规定的刻度后，摇匀处理。
2.2.2 供试品溶液的配制。精密称取12.5mg对照品，将其置于250ml的量瓶中，加入流动相充分溶解，稀释至规定的刻度，然后摇匀。
2.3 测定法
称取对照品溶液与供试品溶液各20μl，然后分别注入液相色谱仪中。
2.4 线性关系试验
精密称取对照品25mg，将其置于100ml的量瓶中，加入流动相稀释溶解后，摇匀，然后分别称取0.02、0.1、0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8、2.0、2.2ml，置于10ml的量瓶中，用流动相进行稀释，达到规定的刻度后，充分摇匀。取20μl进样，然后取各样品溶液中主药峰面积，与样品的浓度C作图，浓度的单位为μg/ml。通过观察发现，样品浓度在1.13-124.39μg/ml的范围内时，进样量与主药峰面积有着良好的线性关系。回归方程Y=14578+19130X，相关系数r=0.9997，（n=10）。具体数据见表1。
由表1可知，盐酸托烷司琼在1.13-124.39μg/ml范围内，呈现出了良好的线性关系。
2.5 精密度试验
规定盐酸托烷司琼标准曲线项下由低、中、高三种浓度，日内精密度分别连续进行5次，日间精密度分别隔日进样5次，两种精密试验结果都比较好，具体试验结果见表2、表3。通过精密度试验可以衡量HPLC法测定结果的准确性，根据平均值以及RSD数值，可以了解测定盐酸托烷司琼的含量。
表2 盐酸托烷司琼日内精密度试验结果
2.6 专属性试验
2.6.1 酸破坏方法。取本品25mg，置25ml量瓶中，加1mol/L盐酸溶液2ml，放置2小时，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至中性，加水至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.6.2碱破坏方法。取本品25mg，置25ml量瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液2ml，放置2小时，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至中性，加水至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.6.3 光破坏方法。取供试品溶液，置于3000LX光照下连续光照16小时，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.6.4 氧化破坏方法。取本品25mg，置25ml量瓶中，加30%过氧化氢溶液2ml，放置2小时，加水至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.6.5 热破坏方法。取供试品溶液，置100℃水浴中加热4小时，取出，放冷，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
专属性试验结果表明本品在热、酸、碱、氧化和光照条件下均有不同程度的降解，各降解产物峰与主成分峰均能达到较好的分离。另外，采用二极管阵列检测器对盐酸托烷司琼峰的起点、最大点、终点三个时间点进行扫描，三个时间点的色谱行为完全相同，说明所选色谱条件测得的盐酸托烷司琼峰为单组分峰，结果表明该色谱条件能满足本品有关物质检查的要求。
2.7 重复性试验
在重复性试验中，精密称取样品6份，严格遵照含量测定法进行试验，测定的结果为，第1次试验盐酸托烷司琼的含量为99.83%，第2次实验盐酸托烷司琼的含量为100.56%，第3次实验盐酸托烷司琼的含量为99.73%，第4次实验盐酸托烷司琼的含量为99.53%，第5次实验盐酸托烷司琼的含量为99.98%，第6次实验盐酸托烷司琼的含量为100.21%。重复性RSD为0.31%。
3 讨论
在选择检测的波长时，取适量对照品，然后加入流动相进行溶解，将其制成每1ml含有50μg盐酸托烷司琼的的溶液，在200-400nm紫外区扫描时，发现在波长为285nm位置吸收最大，所以，试验人员将285nm作为检测的波长。在选择流动相时，需要精密称取相同量对照品，然后加入不同流动相，并以不同的比例进行检测，经过多次试验证明，甲醇-水-乙腈-三乙胺以700：200：100：2的比例配制出的流动相分离效果最佳。采用HPLC法对盐酸托烷司琼的含量进行测定，有着良好的效果，其测定的结果准确性比较高，可靠性也比较好，而且操作时较为简单，操作方法容易掌握，可以保证试验效果的最佳性，在盐酸托烷司琼生产中，可以利用HPLC法进行质量检验。国内、外药典均采用HPLC法控制吲哚-3-甲酸，本研究建立的有关物质的测定方法，能有效准确地测定盐酸托烷司琼中可能存在的部分有关物质。
参考文献
[1]黄力，杨宁，刘海英，苏芳，苗爱东.HPLC法测定复方氯霉素醇溶液中氯霉素的含量[J].中国药事，2009（4）.
[2]刘朝霞，黄海伟，张启明，丁丽霞.HPLC法测定氢溴酸高乌甲素注射液有关物质的研究[J].药物分析杂志，2009（5）.
[3]袁耀佐，钱文，张玫.HPLC法同时测定复方盐酸克林霉素软膏中克林霉素和维A酸的含量及稳定性考察[J].中国抗生素杂志，2009（5）.
[4]宋俊梅，于海云，刘杰.HPLC法测定盐酸托烷司琼片的含量及有关物质[J].齐鲁药事，2006（8）.
关键词：HPLC法；测定；盐酸托烷司琼
盐酸托烷司琼是一种强效的抗结剂，其对放射治疗以及化疗中引起的恶心、呕吐症状有着良好的治疗效果。本文对HPLC法测定盐酸托烷司琼的含量进行了介绍与分析，还对这种方法的测定效果进行了验证，对色谱条件、线性范围以及有关物质的分离情况进行了分析，通过实践证明，这种测定方法测定的准确性较高，而且操作简单，重现性良好。
1 仪器与试药
1.1 仪器
仪器：SHIMADZU SPD-10AVP系统；紫外检侧器；色谱柱为ODSC18柱（4.6×250mm，5μm）。
1.2 试药
采用原料药精制技术制作了盐酸托烷司琼的对照品，将甲醇与乙腈作为色谱纯，将三乙胺作为分析纯，还采用了去离子水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：DiamonsilC18（4.6×250mm，5μm）；检测波长285nm；流动相：甲醇一水一乙睛一三乙胺（700：200：100：2）；流速：1.0ml/min；柱温：35℃。样品分离色谱图见图1。
图1 盐酸托烷司琼HPLC图
注：a.3-吲哚甲酸（已知杂质）；b.未知雜质；c.盐酸托烷司琼
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品配制。精密称取5mg对照品，将其置于100ml的量瓶中，然后加入流动相进行充分的溶解，稀释到规定的刻度后，摇匀处理。
2.2.2 供试品溶液的配制。精密称取12.5mg对照品，将其置于250ml的量瓶中，加入流动相充分溶解，稀释至规定的刻度，然后摇匀。
2.3 测定法
称取对照品溶液与供试品溶液各20μl，然后分别注入液相色谱仪中。
2.4 线性关系试验
精密称取对照品25mg，将其置于100ml的量瓶中，加入流动相稀释溶解后，摇匀，然后分别称取0.02、0.1、0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8、2.0、2.2ml，置于10ml的量瓶中，用流动相进行稀释，达到规定的刻度后，充分摇匀。取20μl进样，然后取各样品溶液中主药峰面积，与样品的浓度C作图，浓度的单位为μg/ml。通过观察发现，样品浓度在1.13-124.39μg/ml的范围内时，进样量与主药峰面积有着良好的线性关系。回归方程Y=14578+19130X，相关系数r=0.9997，（n=10）。具体数据见表1。
由表1可知，盐酸托烷司琼在1.13-124.39μg/ml范围内，呈现出了良好的线性关系。
2.5 精密度试验
规定盐酸托烷司琼标准曲线项下由低、中、高三种浓度，日内精密度分别连续进行5次，日间精密度分别隔日进样5次，两种精密试验结果都比较好，具体试验结果见表2、表3。通过精密度试验可以衡量HPLC法测定结果的准确性，根据平均值以及RSD数值，可以了解测定盐酸托烷司琼的含量。
表2 盐酸托烷司琼日内精密度试验结果
2.6 专属性试验
2.6.1 酸破坏方法。取本品25mg，置25ml量瓶中，加1mol/L盐酸溶液2ml，放置2小时，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至中性，加水至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.6.2碱破坏方法。取本品25mg，置25ml量瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液2ml，放置2小时，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至中性，加水至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.6.3 光破坏方法。取供试品溶液，置于3000LX光照下连续光照16小时，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.6.4 氧化破坏方法。取本品25mg，置25ml量瓶中，加30%过氧化氢溶液2ml，放置2小时，加水至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.6.5 热破坏方法。取供试品溶液，置100℃水浴中加热4小时，取出，放冷，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
专属性试验结果表明本品在热、酸、碱、氧化和光照条件下均有不同程度的降解，各降解产物峰与主成分峰均能达到较好的分离。另外，采用二极管阵列检测器对盐酸托烷司琼峰的起点、最大点、终点三个时间点进行扫描，三个时间点的色谱行为完全相同，说明所选色谱条件测得的盐酸托烷司琼峰为单组分峰，结果表明该色谱条件能满足本品有关物质检查的要求。
2.7 重复性试验
在重复性试验中，精密称取样品6份，严格遵照含量测定法进行试验，测定的结果为，第1次试验盐酸托烷司琼的含量为99.83%，第2次实验盐酸托烷司琼的含量为100.56%，第3次实验盐酸托烷司琼的含量为99.73%，第4次实验盐酸托烷司琼的含量为99.53%，第5次实验盐酸托烷司琼的含量为99.98%，第6次实验盐酸托烷司琼的含量为100.21%。重复性RSD为0.31%。
3 讨论
在选择检测的波长时，取适量对照品，然后加入流动相进行溶解，将其制成每1ml含有50μg盐酸托烷司琼的的溶液，在200-400nm紫外区扫描时，发现在波长为285nm位置吸收最大，所以，试验人员将285nm作为检测的波长。在选择流动相时，需要精密称取相同量对照品，然后加入不同流动相，并以不同的比例进行检测，经过多次试验证明，甲醇-水-乙腈-三乙胺以700：200：100：2的比例配制出的流动相分离效果最佳。采用HPLC法对盐酸托烷司琼的含量进行测定，有着良好的效果，其测定的结果准确性比较高，可靠性也比较好，而且操作时较为简单，操作方法容易掌握，可以保证试验效果的最佳性，在盐酸托烷司琼生产中，可以利用HPLC法进行质量检验。国内、外药典均采用HPLC法控制吲哚-3-甲酸，本研究建立的有关物质的测定方法，能有效准确地测定盐酸托烷司琼中可能存在的部分有关物质。
参考文献
[1]黄力，杨宁，刘海英，苏芳，苗爱东.HPLC法测定复方氯霉素醇溶液中氯霉素的含量[J].中国药事，2009（4）.
[2]刘朝霞，黄海伟，张启明，丁丽霞.HPLC法测定氢溴酸高乌甲素注射液有关物质的研究[J].药物分析杂志，2009（5）.
[3]袁耀佐，钱文，张玫.HPLC法同时测定复方盐酸克林霉素软膏中克林霉素和维A酸的含量及稳定性考察[J].中国抗生素杂志，2009（5）.
[4]宋俊梅，于海云，刘杰.HPLC法测定盐酸托烷司琼片的含量及有关物质[J].齐鲁药事，2006（8）.