目的寻求一种简便、高效的大鼠骨髓树突状细胞(DC)分离与培养的方法。方法处死F344大鼠1只,消毒,取四肢骨,剔除肌肉,剪去骨两端;培养基冲洗骨髓腔,收集细胞悬液,经密度梯度离心得到淋巴单核细胞,加入全RPMI 1640培养基和rrGM-CSFr、rIL-4,培养箱中培养;经倒置显微镜、电镜观察细胞形态,经流式细胞仪鉴定DC纯度,显微镜下细胞计数。结果第4天经倒置显微镜、电镜观察DC出现典型形态;流式细胞仪检测第4天OX62阳性率为8.92%、MHC-Ⅱ为20.9%、CD86为16.98%;第8天OX62阳性率为58.07%、MHC-Ⅱ为60.49%、CD86为62.94%;第15天OX62阳性率为84.68%、MHC-Ⅱ为88.03%、CD86为62.80%。显微镜下细胞计数DC数量为(1.0~2.0)×107。结论应用梯度分离加细胞培养分离纯化大鼠DC,其纯度较高(80%以上),数量大[(1.0~2.0)×107]。