【摘 要】
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Red同源重组系统和高效自杀性载体系统都能对革兰氏阴性菌染色体直接进行修饰,本试验利用上述2种系统敲除不同来源肠炎沙门氏菌菌株SEF14菌毛操纵子亚单位sefD或sefA基因,并
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Red同源重组系统和高效自杀性载体系统都能对革兰氏阴性菌染色体直接进行修饰,本试验利用上述2种系统敲除不同来源肠炎沙门氏菌菌株SEF14菌毛操纵子亚单位sefD或sefA基因,并对构建肠炎沙门氏菌突变株方法进行比较。本研究成功构建了国际、国内标准株,鸡源和人源国内分离株sefD和sefA缺失株各4株。Red同源重组系统中能将PCR产物一步法直接转化肠炎沙门氏菌,通过同源重组序列发生同源重组交换,但对PCR产物和感受态细胞的质量要求很高,一次重组效率很低,而二次重组过程则相对简单、高效。自杀性载体系统若将构建好的含同源DNA片段的重组质粒转化宿主菌,其一次重组效率高,二次重组也只需蔗糖筛选传代丢失抗性质粒。Red同源重组系统将在染色体中残留FRT位点;而自杀性载体系统在染色体中可不留任何痕迹。所以2个系统都能对不同源肠炎沙门氏菌染色体进行直接修饰,而且易删除抗性选择标志,与传统的高效自杀性载体系统比较,Red同源重组系统更方便快捷,省时省力。
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