【摘 要】
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目的 制备高亲和力、高特异性的抗人骨唾液蛋白(BSP)单克隆抗体(mAb),并对其生物学特性进行鉴定,为BSP作为乳腺癌骨转移临床诊断靶点的研究奠定基础.方法 重组BSP蛋白免疫BAL
【机 构】
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南方医科大学生物技术学院抗体工程研究所,广州军区广州总医院中医科
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目的 制备高亲和力、高特异性的抗人骨唾液蛋白(BSP)单克隆抗体(mAb),并对其生物学特性进行鉴定,为BSP作为乳腺癌骨转移临床诊断靶点的研究奠定基础.方法 重组BSP蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,经筛选建立可稳定分泌抗BSPmAb细胞株,制备腹腔积液,Protein G纯化.ELISA检测抗体的效价和亲和力,并用亚型鉴定试纸条鉴定mAb的亚型.应用Western blotting检测mAb的特异性,进一步利用纯化的mAb经免疫组织化学法检测乳腺癌细胞MDA-MB-231中BSP的表达情况.结果 获得9株抗BSP mAb细胞株,选择其中2株(D001和D002)进一步鉴定,其上清效价分别为1∶5120和1∶10 240,腹腔积液效价分别为1∶25 600和1∶51 200.2株抗体亚型均为IgG1型,轻链均为κ型.Western blotting结果 均在预期位置出现阳性条带.利用此2株细胞株所得抗体均可在乳腺癌细胞MDA-MB-231中检测到BSP的表达.结论 成功制备能特异性识别BSP的mAb,为进一步研究BSP的生物学功能以及对BSP作为乳腺癌骨转移的标志物进行临床评价奠定基础.
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