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根据桦褐孔菌（Inonotus obliquus）酸性蛋白酶（Acid protease，AP）基因（10-AP）序列密码子的偏好性优化选择酶切位点和载体，成功构建pGEX-4T1-1AP原核表达载体；用热激法将该载体转化到大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中，构建桦褐孔菌酸性蛋白酶（IO-AP）重组菌。以此重组菌表达的IO-AP以包涵体形式存在，重组蛋白分子质量约为60kDa。以获得的较高纯度的重组IO-AP作为免疫原，采用传统3-2-2-2免疫方式免疫4只Balb／C小鼠，