活化激酶C受体1对胆管癌细胞迁移和侵袭能力的影响

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目的

检测活化激酶C受体1(RACK1)在胆管癌细胞中的表达,探讨其对胆管癌细胞生物学表型的影响。

方法

实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RACK1在人正常胆管上皮细胞HIBEC和2株胆管癌细胞RBE、HUH28中的表达水平。采用t检验分析RACK1细胞水平表达差异。慢病毒构建RACK1低表达稳定株,分为sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组和阴性对照组(NC-RACK1组),qPCR检测其转染效率;Transwell实验检测胆管癌细胞的迁移和侵袭能力。采用t检验分析敲低RACK1后胆管癌细胞的迁移和侵袭能力变化。

结果

qPCR结果显示RACK1在RBE、HUH28胆管癌细胞株中的表达量(3.45±0.92、3.21±0.33)明显高于人正常胆管上皮细胞HIBEC(1.43±0.58,t=21.965、24.153,P<0.01),差异均有统计学意义;Western blot结果表明RACK1在RBE和HUH28胆管癌细胞株中的表达水平明显高于人正常胆管上皮细胞HIBEC;Transwell迁移实验结果提示RBE中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量为[(261.89±8.65)、(231.07±9.73)个/视野],明显低于NC-RACK1组[(430.19±10.15)个/视野,t=30.684、24.380,P<0.01],差异均有统计学意义;HUH28中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量[(253.57±7.28)、(210.11±6.09)个/视野]低于NC-RACK1组[(424.78±8.03)个/视野,t=35.442、36.781,P<0.01],差异均有统计学意义;侵袭实验结果表明RBE中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量为[(52.15±1.43)、(60.58±2.01)个/视野]明显低于NC-RACK1组[(125.39±4.03)个/视野,t=9.935、12.566,P<0.05],差异均有统计学意义;HUH28中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量[(60.91±1.30)、(51.19±0.96)个/视野]低于NC-RACK1组[(150.88±7.28)个/视野,t=13.554、15.328,P<0.01],差异均有统计学意义。

结论

RACK1在胆管癌细胞中表达上调,降低RACK1表达后可抑制胆管细胞迁移及侵袭能力,RACK1可促进胆管癌发生发展。

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