论文部分内容阅读
目的
探讨沉默SMMC-7721中微小RNA(miRNA，miR)-16的表达对化疗耐药的影响及机制。
方法采用慢病毒载体构建稳定细胞株，应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-16的表达及Western blot检测靶基因κB激酶抑制剂β (IKBKB)的表达确定构建结果。采用Western blot及噻唑蓝(MTT)比色法检测各细胞株对紫杉醇的敏感性及耐药机制。
结果7721-miR16组的miR-16表达量显著高于SMMC-7721组及7721-mock组(6.06±0.18比1.00±0.13比0.87±0.03，P＝0.000)。7721-shmiR组靶基因IKBKB蛋白表达量是7721-shmock组的25.73倍(P＝0.000)。7721-shmiR16细胞株中多药耐药蛋白1(MDR1)表达显著增加，对紫杉醇的半数抑制浓度(IC50)为4.903 μmol/L，是对照组(0.461 μmol/L)的10.64倍(P＝0.000)。Western blot结果显示沉默miR-16主要通过激活细胞核因子-κB(NF-κB)通路导致MDR1表达增加。
结论沉默SMMC-7721中miR-16的表达，能显著增加IKBKB的表达，从而导致SMMC-7721细胞对紫杉醇耐药。