探讨程序性死亡受体配体-1(PD-L1)促进食管癌细胞Eca-109上皮-间充质转化(EMT)的作用机制。
方法选用人食管癌细胞Eca-109细胞，经转染重组慢病毒载体分别构建PD-L1下调表达(LV-PD-L1-shRNA)、PD-L1过表达(LV-PD-L1-WT-OE)、PD-L1胞内段缺失型过表达(LV-PD-L1-TN-OE)的稳定表达细胞株，以及对照组LV-NC及LV-Vector-Ctrl细胞株，经PD-1融合蛋白或对照IgG分别刺激上述5种细胞株，实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测EMT相关标物上皮型钙黏蛋白(E-cad)、神经型钙黏蛋白(N-cad)、E盒结合锌指蛋白1(Zeb1)和波形蛋白(Vim)等mRNA表达，Western blot检测EMT相关标物E-cad、N-cad、Zeb1、Vim等蛋白表达水平。
结果成功构建LV-PD-L1-shRNA、LV-PD-L1-WT-OE、LV-PD-L1-TN-OE、LV-NC及LV-Vector-Ctrl细胞株。mRNA水平，LV-PD-L1-shRNA与LV-NC比较，E-cad显著上调、N-cad、Zeb1及Vim显著下调(P<0.05)；LV-PD-L1-WT-OE与LV-Vector-Ctrl比较，E-cad显著下调、N-cad、Zeb1及Vim显著下调(P<0.01)；LV-PD-L1-TN-OE与LV-PD-L1-WT-OE比较，E-cad显著上调、N-cad、Zeb1及Vim显著下调(P<0.01)。选用PD-1融合蛋白(5 μg/ml)对LV-PD-L1-shRNA、LV-PD-L1-WT-OE、LV-PD-L1-TN-OE、LV-NC、LV-Vector-Ctrl等细胞株刺激24 h，结果表明，LV-PD-L1-shRNA与LV-NC比较，N-cad及Zeb1表达水平显著降低(P<0.05)，LV-PD-L1-WT-OE与LV-Vector-Ctrl比较，N-cad、Zeb1及Vim表达水平显著增加(P<0.05)，LV-PD-L1-WT-OE与LV-PD-L1-TN-OE比较，Zeb1及Vim表达水平显著增加(P<0.05)，但LV-PD-L1-TN-OE及LV-Vector-Ctrl经PD-1融合蛋白刺激后，差异无统计学意义。
结论食管癌细胞异常表达PD-L1与EMT密切相关，PD-L1分子胞内段在调节食管癌细胞EMT过程中发挥重要作用。