【摘 要】
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目的 研究线粒体DNA(mtDNA)与肿瘤发生的关系 ,提供一种可以对mtDNA进行快速、准确的定量和缺失检测的方法。方法 利用改进的PCR方法对 2例正常人外周血白细胞及 5例胃癌患
【机 构】
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中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所,中国医科大学生物芯片中心,中国医科大学附属第一医院干诊科,中国医科大学生物芯片中心,中国医科大学生物芯片中心,中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所 110001沈阳,
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目的 研究线粒体DNA(mtDNA)与肿瘤发生的关系 ,提供一种可以对mtDNA进行快速、准确的定量和缺失检测的方法。方法 利用改进的PCR方法对 2例正常人外周血白细胞及 5例胃癌患者癌组织进行线粒体基因组的全序列 (16569bp)扩增 ,同时标记荧光素 ;然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染加以证实。设计出 17对叠加引物扩增mtDNA探针 ,用芯片点样仪将其点到经过氨基化的玻片上 ,制成芯片 ,杂交。GeneTACTM激光扫描仪扫描芯片得出扫描图像 ,最后用ScanAnalyzer得出阵列数据 ,对mtDNA拷贝量准确定量。结果 扩增的 17对探针经聚丙烯酰胺凝胶电泳银染显示 ,设计合理 ,特异性高。改进的PCR方法对线粒体全基因组的扩增效率高 ,银染后结果显示 ,杂带少 ,特异性强 ,产量丰富。芯片杂交后扫描图像清晰、背景低 ;阴性探针信号接近背景信号 ,两者间差异无显著性 (P >0 .0 5)。实验结果与设计的实验完全符合 ,对同一血白细胞和胃癌组织样本的多次杂交后数据分析得出 ,同一样本同一阳性探针数据间差异无显著性 (P >0 .0 5) ,而两种样本间数据差异显著(P <0 .0 1)。杂交信号稳定 ,数据分布集中 (均值两侧一倍标准差范围内 ) ,显示了非常好的可重复性。结论 已知mtDNA的大片段或整个基因组的缺失 ,以及拷贝数量的改变与肿瘤发生?
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