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利用生产纳豆激酶的Bacillus subtilis进行深层发酵。采用发酵液离心除菌,20%~60%饱和度的硫酸铵沉淀,Superdex75凝胶过滤层析和SPSepharose Fast Flow离子交换层析对活性组分进行分离提纯。用纤维平版法测定了活力,并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)对分离纯化的效果进行了检验。结果表明在SDS-PAGE中观察到单一条带,分子量27.7kD,最终纯化倍数和酶活回收率分别为8.4和49%。