β-葡萄糖苷酶的分离纯化和性质研究

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β-葡萄糖苷酶是纤维素酶的重要组分之一,它不仅可水解纤维二糖和寡糖,更可解除纤维二糖对β-1,4-内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶的抑制,提高水解速率和程度.利用SephadexG-150和DEAE-SephadexA-50层析法从黑曲霉变异株L-22中分离提纯了β-葡萄糖苷酶,该酶是由两个分子量相同的亚基组成的二聚体,每个亚基分子量为203kD.该酶最适pH为4.8,pH稳定范围在3.6~6.4;最适温度是60℃,温度稳定范围为4~60℃;酶分子含糖量为8.35%.它是一个酸性β-葡萄糖苷水解酶,专一性地水解β-糖苷键.而不水解α-糖苷键,对短链底物表现了相对高的活力.用动力学分析和共价化学修饰方法探讨了与该酶活力有关的必需基团.由pH对lgVm和lgVm/Km的影响,推测出酶活性部位至少有两个可解离基团为酶活性所必需,它们在酶-底物复合物中的pKes1和pKes2的值分别为4.0和5.6,在游离酶中的pK值分别为4.2和5.9.由此可初步判断这两个可解离基团可能为组氨酸和含羧基的氨基酸,它们与酶的催化和底物结合可能有关.
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