【摘 要】
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目的 对类鼻疽伯克霍尔德菌TssE-6蛋白进行原核表达和蛋白纯化并进行生物信息学分析.方法 采用BamHI和HindⅢ双酶切PCR纯化产物和pET30a(+)载体后连接,构建pET30a(+)-tssE-6重组质粒,转化到BL21大肠埃希菌中,利用1 mmol/L ITPG诱导,获得目的 蛋白,进行10％SDS-PAGE、Western blot验证及Ni2+柱纯化,利用生物学信息学软件对TssE-6蛋白进行预测和分析.结果 成功对TssE-6蛋白进行了原核表达,经10％SDS-PAGE和Western
【机 构】
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海南医学院热带医学与检验医学院,热带生物医学技术实验室,海南海口571199;武汉市中医院检验科
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目的 对类鼻疽伯克霍尔德菌TssE-6蛋白进行原核表达和蛋白纯化并进行生物信息学分析.方法 采用BamHI和HindⅢ双酶切PCR纯化产物和pET30a(+)载体后连接,构建pET30a(+)-tssE-6重组质粒,转化到BL21大肠埃希菌中,利用1 mmol/L ITPG诱导,获得目的 蛋白,进行10％SDS-PAGE、Western blot验证及Ni2+柱纯化,利用生物学信息学软件对TssE-6蛋白进行预测和分析.结果 成功对TssE-6蛋白进行了原核表达,经10％SDS-PAGE和Western blot验证,包含组氨酸标签的蛋白相对分子质量为24.2×103.TssE-6为不可溶包涵体蛋白,Ni2+柱纯化蛋白的浓度为3.0 mg/ml,目的 条带单一.TssE-6蛋白为含有170个氨基酸的不稳定亲水蛋白,带负电荷,分子式C851H1349N235O255S7,理论相对分子质量为19.17691×103,二级结构中α螺旋和无规卷曲分别占46.47％和40.00％.结论 获得高纯度的重组TssE-6蛋白,预测该蛋白具有亲水性,为进一步研究TssE-6在T6SS中的功能以及新的检测标志物奠定了理论基础.
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