【摘 要】
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目的 对表皮葡萄球菌VraSR进行生物信息学分析并原核表达VraR蛋白,为表皮葡萄球菌VraSR系统功能研究奠定基础.方法 PCR扩增表皮葡萄球菌SE1457菌株vraR基因,PCR片段经酶切后连入载体pET28a,构建重组表达质粒pET28a-vraR,并转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达.重组蛋白His6-VraR经Western blot鉴定后采用Ni-NTA柱纯化.采用DNAMAN、SMART、Megalign等软件对VraSR系统进行生物信息学分析.结果 成功构建重组表达质粒pET28
【机 构】
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大理大学基础医学院病原生物学综合实验室,云南大理671000;大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室
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目的 对表皮葡萄球菌VraSR进行生物信息学分析并原核表达VraR蛋白,为表皮葡萄球菌VraSR系统功能研究奠定基础.方法 PCR扩增表皮葡萄球菌SE1457菌株vraR基因,PCR片段经酶切后连入载体pET28a,构建重组表达质粒pET28a-vraR,并转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达.重组蛋白His6-VraR经Western blot鉴定后采用Ni-NTA柱纯化.采用DNAMAN、SMART、Megalign等软件对VraSR系统进行生物信息学分析.结果 成功构建重组表达质粒pET28a-vraR,在22℃、0.5 mmol/L IPTG诱导12h高效表达重组蛋白His6-VraR.分析重组His6-VraR序列,与金黄色葡萄球菌VraS/VraR核苷酸同源性皆为82％,氨基酸同源性分别为92％/94％,氨基酸组成差异主要存在VraS的胞外区和VraR的CheY结构域.结论 成功表达并纯化表皮葡萄球菌VraR蛋白,生物信息学分析表皮葡萄球菌VraSR的功能,可能不同于金黄色葡萄球菌.
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