观察小干扰RNA(siRNA)沉默精子相关抗原9(SPAG9)基因对肾癌细胞生物学功能的影响。
方法体外培养人肾癌细胞786-O和OS-RC-2(购自中国科学院上海细胞库)；应用siRNA转染下调SPAG9在786-O和OS-RC-2的表达；分组采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)分析转染后SPAG9在786-O和OS-RC-2中mRNA及蛋白的表达水平；细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测转染24、48、72、96 h后786-O及OS-RC-2的增殖活性；Transwell法检测转染后786-O、OS-RC-2的迁移与侵袭能力；Western blot分析转染后786-O、OS-RC-2中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)的蛋白表达量；利用小管形成实验观察SPAG9基因沉默后，786-O血管形成能力的变化。采用t检验。
结果(1)RT-PCR及Western蛋白印迹结果提示siRNA能够有效沉默786-O及OS-RC-2中SPAG9 mRNA和蛋白的表达。si-Ctrl组表达量为参照和786-Osi-SPAG9组、OS-RC-2si-SPAG9组mRNA及蛋白的表达量为(0.41±0.02、0.12±0.03，t＝14.420，P<0.01)、(0.64±0.02、0.13±0.01，t＝36.690，P<0.01)；(1.36±0.13、0.83±0.04，t＝6.816，P<0.05)、(0.93±0.01、0.63±0.04，t＝12.410，P<0.05)。(2)SPAG9基因沉默后对786-O以及OS-RC-2增殖能力无明显影响，差异无统计学意义(t＝3.182、6.674，P>0.05)。(3)SPAG9敲低后的786-O以及OS-RC-2迁移、侵袭能力显著降低，si-Ctrl组和786-Osi-SPAG9组、OS-RC-2si-SPAG9组迁移细胞数目为(105.32±10.13)、(53.34±5.17)个(t＝9.232，P<0.05)、(132.00±11.23)、(65.45±7.23)个(t＝11.161，P<0.05)；侵袭细胞数目为(88.33±16.56)、(32.08±6.79)个(t＝6.093，P<0.05)、(90.67±13.01)、(28.67±4.02)个(t＝5.924，P<0.05)。(4)SPAG9基因沉默后，786-O血管形成能力明显降低。si-Ctrl组、786-Osi-SPAG9组中平均管样结构数为12.56±2.40、3.05±0.86(t＝2.254，P<0.05)。(5)Western blot显示转染后的786-O和OS-RC-2细胞中，MMP-2的蛋白表达量显著降低。si-Ctrl组和786-Osi-SPAG9组、OS-RC-2si-SPAG9组中MMP-2的相对表达量为0.37±0.02、0.24±0.01(t＝8.712，P<0.001)、0.26±0.01、0.21±0.02(t＝4.558，P<0.05)；而TIMP-2的表达量显著升高，其相对表达量为0.52±0.03、0.59±0.03(t＝2.720，P>0.05)、0.52±0.01、0.54±0.01(t＝2.102，P>0.05)。
结论SPAG9基因具有促进肾癌细胞迁移、侵袭及血管形成的能力，其机制可能与MMP-2的激活有关。