探讨血浆中细胞外组蛋白能否通过介导外周血单个核细胞（PBMC）焦亡加重急性呼吸窘迫综合征（ARDS）患者炎症反应。
方法选择2019年4月至9月同济大学附属上海市肺科医院收治的20例ARDS患者；选择同期进行健康体检的20例健康志愿者作为健康对照组。体内实验：采集ARDS患者确诊24 h内和健康体检者的外周血标本，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆细胞外组蛋白以及炎性因子白细胞介素（IL-1β、IL-18）和乳酸脱氢酶（LDH）水平。提取PBMC，用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测焦亡标志分子消皮素-D N端（GSDMD-N）蛋白表达。体外实验：分离培养健康志愿者外周血PBMC并分为4组：空白对照组不给予任何处理；脂多糖（LPS）组以1 mg/L的LPS处理细胞4 h；LPS+组蛋白组在LPS处理4 h后加入100 mg/L外源性组蛋白处理24 h；LPS+组蛋白+肝素组在LPS和外源性组蛋白处理后的细胞中加入200 U肝素干预24 h。采用Western Blot试验检测各组细胞GSDMD-N蛋白表达；采用ELISA法检测细胞上清中IL-1β、IL-18和LDH的水平。各指标间相关性采用Spearman检验。
结果体内实验结果：与健康对照组相比，ARDS患者PBMC中GSDMD-N蛋白表达明显增加〔GSDMD-N/GAPDH：0.136（0.062，0.246）比0.026（0.018，0.036），P<0.01〕，血浆中IL-1β、IL-18、LDH和细胞外组蛋白水平亦明显升高〔IL-1β（ng/L）：120.0（94.2，213.0）比88.5（82.3，105.3），IL-18（ng/L）：164.5（70.8，236.3）比60.5（52.0，89.0），LDH（U/L）：30.9（24.7，39.5）比19.8（17.2，21.5），细胞外组蛋白（mg/L）：73.0（42.8，112.9）比12.2（9.6，16.9），均P<0.01〕，提示ARDS患者PBMC发生显著焦亡且有大量炎性因子释放；ARDS患者氧合指数（PaO2/FiO2）为135.5（94.5，196.0）mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa）。相关性分析显示，ARDS患者GSDMD-N蛋白表达与PaO2/FiO2呈显著负相关（r＝-0.935，P<0.01），与IL-1β、IL-18、LDH以及细胞外组蛋白水平均呈显著正相关（r值分别为0.844、0.843、0.887、0.899，均P<0.01）。体外实验结果：与空白对照组比较，LPS组PBMC中GSDMD-N蛋白表达和细胞上清中炎性因子水平均明显升高〔GSDMD-N/GAPDH：0.035±0.006比0.028±0.006，IL-1β（ng/L）：39.8±5.5比22.6±4.7，IL-18（ng/L）：31.2±4.4比20.0±2.2，LDH（U/L）：51.2±7.3比36.6±7.6，均P<0.05〕，说明LPS刺激能增加PBMC焦亡和炎性因子释放；与LPS组比较，LPS+组蛋白组GSDMD-N蛋白表达和炎性因子水平进一步升高〔GSDMD-N/GAPDH：0.114±0.009比0.035±0.006，IL-1β（ng/L）：119.0±18.7比39.8±5.5，IL-18（ng/L）：49.2±8.5比31.2±4.4，LDH（U/L）：127.8±19.8比51.2±7.3，均P<0.01〕，说明给予外源性组蛋白处理后能明显放大LPS对PBMC的刺激作用，上调GSDMD-N蛋白表达和促进炎性因子释放，进一步诱导PBMC焦亡；而肝素能拮抗外源性组蛋白的促焦亡作用，GSDMD-N蛋白表达和炎性因子水平均较LPS+组蛋白组明显降低〔GSDMD-N/GAPDH：0.063±0.004比0.114±0.009，IL-1β（ng/L）：46.8±8.6比119.0±18.7，IL-18（ng/L）：33.0±5.1比49.2±8.5，LDH（U/L）：65.4±11.0比127.8±19.8，均P<0.05〕。
结论血浆中细胞外组蛋白通过介导PBMC焦亡能够加重ARDS炎症反应。