【摘 要】
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目的构建人微管相关蛋白轻链3（LC3）与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合表达的真核表达载体（pLC3-EGFP）并在哺乳动物细胞中表达,为研究自噬的过程及机制提供实验基础。方法应用RT-PCR从
【基金项目】
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国家自然科学基金（N0：81172712）,湖南省自然科学基金（No：11JJ6078）,湖南省教育厅优秀青年基金（No：098087）
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目的构建人微管相关蛋白轻链3（LC3）与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合表达的真核表达载体（pLC3-EGFP）并在哺乳动物细胞中表达,为研究自噬的过程及机制提供实验基础。方法应用RT-PCR从人胚肾细胞系HEK293T细胞中扩增全长LC3基因,将产物LC3 cDNA片段亚克隆入载体pEGFP-N3,筛选阳性克隆,提取质粒测序进行鉴定。将表达质粒pLC3-EGFP转染HEK293T细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的表达与定位,western blot检测LC3-EGFP蛋白的表达。结果测序结果表明,
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