【摘 要】
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目的通过构建体外质粒DNA作为质控样本开展MTHFR677基因检测室间质量评价计划(简称室间质评)，评估参评实验室检测能力及存在的问题，提高临床实验室MTHFR基因检测质量。方法利用基因工程技术体外构建含有MTHFR677位点野生型(C)上下游序列的重组质粒，并采用定点突变技术得到该位点的突变型(T)，分别作为野生型和突变型样本，两者等比例混合后作为杂合突变型样本，并制备质控样本盘开展室间质量评价
【机 构】
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200126 上海市临床检验中心 临床细胞分子遗传学研究室,200126 上海市临床检验中心 临床细胞分子遗传学研究室,200126 上海市临床检验中心 临床细胞分子遗传学研究室,200126 上海市
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目的通过构建体外质粒DNA作为质控样本开展MTHFR677基因检测室间质量评价计划(简称室间质评)，评估参评实验室检测能力及存在的问题，提高临床实验室MTHFR基因检测质量。
方法利用基因工程技术体外构建含有MTHFR677位点野生型(C)上下游序列的重组质粒，并采用定点突变技术得到该位点的突变型(T)，分别作为野生型和突变型样本，两者等比例混合后作为杂合突变型样本，并制备质控样本盘开展室间质量评价。2016年和2017年室间质评计划为一年两次，样本盘包含5支样本，覆盖MTHFR 677位点各种基因型别。要求参评实验室收到样本后在规定时间内检测样本并网上上报位点基因型检测结果。4次室间质评分别收到26份、28份、52份和56份有效汇报结果。依据回报结果计算各实验室成绩，使用Microsoft Excel软件进行统计分析，汇总各样本的总体符合率，并分析不同检测方法的符合率和检测错误类型。
结果体外构建的重组质粒经Sanger测序验证分别含有MTHFR 677位点野生型(C)和突变型(T)序列，作为质控品在4次室间质评中并无出现检测失败的样本。2016年和2017年4次室间质评中成绩满分的实验室分别为96.15%(25/26)，100%(28/28)，96.15%(50/52)和98.21%(55/56)。4次室间质评中，样本检测的总体符合率分别为99.23%(129/130)，100%(140/140)，96.92%(252/260)和98.93%(277/280)。荧光分子杂交和芯片杂交法检测的样本符合率均为100%；荧光PCR法检测的样本符合率为97.5%(39/40)，100%(45/45)，94.29%(66/70)和100%(95/95)；Sanger测序法样本符合率为100%(20/20)，100%(15/15)，90%(36/40)和92.5%(37/40)。
结论本研究所制备的质控样本能够有效监测试剂检测性能，具有良好的适用性。各实验室在MTHFR 677基因位点检测总体准确率很高，但个别实验室检测能力有待提高。临床实验室的质量控制对于保证检测结果准确性具有十分重要的作用。(中华检验医学杂志，2018, 41：749-754)
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