【摘 要】
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目的:利用Boyden chamber 体外迁移体系初步探索基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)在人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)迁移中的作用及其信号转导机制.方法:以HUVEC为实验材料,首先利
【机 构】
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郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所,郧阳医学院生理学教研室
【基金项目】
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湖北省自然科学基金;郧阳医学院科研启动基金;湖北省卫生厅科研项目;湖北省教育厅科研项目
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目的:利用Boyden chamber 体外迁移体系初步探索基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)在人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)迁移中的作用及其信号转导机制.方法:以HUVEC为实验材料,首先利用免疫荧光技术及蛋白印迹方法检测HUVEC表达SDF-1α受体CXCR4,其次利用Boyden chamber体外迁移体系,先观察不同浓度的SDF-1α对HUVEC迁移的影响,最后以磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)阻断剂wortmannin(50M)或LY294002(10μM)、丝裂酶原活化蛋白激酶(MAPK)阻断剂PD98059(50 μM)、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)阻断剂U73122(10μM)、CXCR4特异性阻断剂AMD3100(0.1 mg/ml)等不同预处理HUVEC 30 min,观察分析SDF-1α对HUVEC迁移影响的信号转导通路.结果:培养的HUVEC表达SDF-1α受体CXCR4,HUVEC体外迁移能力随着SDF-1α浓度的递增而逐渐增强,并且SDF-1α浓度在100 ng/ml时,HUVEC迁移到滤膜上的细胞数最多;wort-mannin、LY294002、PD98059、U73122、AMD3100对HUVEC迁移均有影响,其中U73122、AMD3100对HUVEC迁移阻断的效应最显著.结论:SDF-1α/CXCR4所介导的HUVEC迁移与MAPK)、PI-PLC和蛋白激酶C(PKC)等信号途径有关,且PKC途径可能处于中心环节.
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