【摘 要】
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目的构建人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)特异性噬菌体抗体库,制备人源抗HIV-1gp120单克隆抗体。方法以半巢式聚合酶链反应(PCR)从HIV-1感染者外周血单个核淋巴细胞中扩增抗体重链Fd和轻链(k)基因,与噬菌体载体pComb3连接,构建
【机 构】
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北京地坛医院病毒研究中心,中国科学院微生物研究所
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目的构建人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)特异性噬菌体抗体库,制备人源抗HIV-1gp120单克隆抗体。方法以半巢式聚合酶链反应(PCR)从HIV-1感染者外周血单个核淋巴细胞中扩增抗体重链Fd和轻链(k)基因,与噬菌体载体pComb3连接,构建噬菌体抗体Fab组合文库。对抗体库进行3轮吸附-洗脱-扩增的亲和选择后,以ELISA法筛选抗HIV-1gp120噬菌体抗体,并进行DNA序列分析和Fab的可溶性表达。结果半巢式PCR有效地扩增出Fd和k基因,以此构建成容量为195×107的噬菌体抗体库。3轮亲和选择使特异性抗体得到高度富集,抗HIV-1gp120噬菌体抗体阳性克隆占32%。对一阳性克隆抗体基因CH1和CL部分DNA序列进行了测定,并在大肠杆菌表达出可溶性Fab。结论抗HIV-1特异性噬菌体抗体库的构建和人源抗HIV-1gp120单克隆抗体的制备为今后筛选抗HIV中和抗体奠定了基础,具有重要的应用价值。
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