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以草原4号紫花苜蓿无菌苗为材料，选择直接和间接两种再生途径进行再生。结果表明：以下胚轴和子叶为外植体建立的间接再生体系，最优愈伤培养基为1mg/L 2,4-D+0.2mg/L KT,14d诱导率分别为100%和72.41%;最佳分化培养基为0.5mg/L 6-BA+0.9mg/L KT,60d后的分化率分别为88.89%和80.00%;不定芽接种到生根培养基（1/2 MS+0.1mg/L NAA+20g蔗糖+5.5g/L琼脂）40d后生根率可达73.30%;下胚轴为外植体的再生体系诱导愈伤和分化效果均优于以子叶为外植体。以子叶节为外植体建立直接再生体系，通过基础培养基就可获得再生植株，经55d培养就可炼苗移栽且生根率为84.44%。两种方法中，直接分化途径的再生体系更为高效省时，为后续遗传转化奠定了技术基础。