猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的不同阶段猪表现出不同症状的一种传染病,目前在我国广泛流行。本研究针对GenBank中PRV的gE基因序列进行比较分析,在其保守区设计了特异性探针和PCR引物,通过优化反应条件,建立了可以区别野毒株和基因缺失疫苗株的TaqMan荧光定量PCR检测方法。该方法可特异性地检测出野毒感染而对基因缺失疫苗株、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒无检测信号。对PRV检测的灵敏度可达10个模板拷贝数,是普通PCR的100倍。试验对PCR反应体系进行摸索,通过优化的冻干工艺制备出PRV全预混PCR试剂,该冻干试剂室温25℃保存3个月、37℃保存15d,敏感性仍为10个拷贝,与0d的检测结果相同,推测储存于4℃的有效期约为24个月;利用手持单通道荧光PCR仪,可在42min时间内完成核酸诊断。本试验基于荧光定量PCR检测方法,结合核酸扩增体系冻干工艺制备的PRV PCR冻干试剂具有耐保存便于运输、准确性高,在PRV快速诊断上有重要意义。