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[摘要] 目的 研究托瑞米芬及联合长春瑞滨对兔VX2肿瘤模型影响，为肿瘤化疗提供新的途径及方法。 方法 32只健康日本大耳白兔VX2肿瘤细胞的传代建立移植瘤动物模型后随机分成VX2肿瘤组织皮下移植瘤模型托瑞米芬干预组（A组）、VX2肿瘤组织皮下移植瘤模型长春瑞滨干预组（B组）、VX2肿瘤组织皮下移植瘤模型长春瑞滨联合托瑞米芬干预组（C组）、VX2肿瘤组织皮下移植瘤模型对照组（D组）4组，每组8只。分别于给药后2、3、4周计算瘤体体积及瘤体生长率。自接种肿瘤细胞当天计至30 d后处死白兔并进行病理取样，甲醛固定、石蜡包埋、切片、HE染色，观察肿瘤组织病理结果。 结果 联合用药组移植瘤生长率第2周与各组比较差异有统计学意义（均P＜0.01），第3、4周较对照组差异有统计学意义（P＜0.01），与托瑞米芬组比较差异有统计学意义（P＜0.05），与长春瑞滨组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论 联合用药组、长春瑞滨组及托瑞米芬组对接种肿瘤细胞的生长均有不同程度的抑制作用，其中联合用药组对肿瘤细胞的作用明显，托瑞米芬对长春瑞滨有明显的协同作用。
[关键词] 托瑞米芬；长春瑞滨；联合用药；抑制率；凋亡；协同作用
[中图分类号] R73-36+1???[文献标识码] A???[文章编号] 2095-0616（2012）10-29-03
托瑞米芬（toremifene，TOR）是一种非类固醇类三苯乙烯衍生物，适用于绝经后妇女雌激素受体阳性或不详的转移性乳腺癌。长春瑞滨（vinorelbine）抗肿瘤药，用于非小细胞肺癌、乳腺癌以及难治性淋巴瘤、卵巢癌等。据有关研究，托瑞米芬与长春瑞滨联合应用明显抑制兔VX2肿瘤组织皮下移植瘤生长。
托瑞米芬是新一代抗雌激素、抗肿瘤药物，作用机制：药物ER复合物通过托瑞米芬竞争性与乳腺癌细胞浆内的雌激素受体（ER）结合，特异mRNA和蛋白质的合成受雌激素影响，在细胞核内复合物与雌激素依赖基因结合可调节雌激素的诱导作用，进而阻碍细胞的分化和增殖[1-2]。长春瑞滨是一种生物碱类药物，作用机制：药物作用于微管蛋白上并控制细胞分裂终止于中期，主要通过抑制细胞分裂，阻碍其继续分裂形成纺锤体，抑制RNA多聚酶的活力，蛋白质的代谢受到一定程度干扰，阻碍细胞膜类脂质的合成，干扰细胞膜上氨基酸的转运过程，因此癌细胞的分裂繁殖受到抑制，最终癌细胞死亡[3-4]。
1?材料与方法
1.1?材料
选用由延边大学医学部动物科提供的日本大耳白兔32只，雌雄不限，4月龄，体重2.0～2.5 kg；荷VX2鳞癌新西兰大白兔由第四军医大学附属唐都医院介入放射科张洪新副教授惠赠；托瑞米芬（枢瑞，宁波市天衡制药有限公司），40 mg/片；长春瑞滨（盖诺，江苏豪森药业股份有限公司），规格：1 mL：10 mg（以C45H54N4O8计）；PBS缓冲液（武汉博士德）。
1.2?方法
32只健康日本大耳白兔VX2肿瘤细胞的传代建立移植瘤动物模型后按体重随机分为A、B、C、D 4组，每组8只；A组：VX2肿瘤组织皮下移植瘤模型托瑞米芬干预组；B组：VX2肿瘤组织皮下移植瘤模型长春瑞滨干预组；C组：VX2肿瘤组织皮下移植瘤模型长春瑞滨联合托瑞米芬干预组；D组：VX2肿瘤组织皮下移植瘤模型对照组。A组和C组的白兔均给予60 mg/（kg·d）的托瑞米芬灌胃治療，再托瑞米芬灌胃治疗5 d后，对B组及C组白兔给予长春瑞滨静脉注射治疗（第1天与第8天2次2.0 mg/只）。托瑞米芬持续给药至第7天结束，自接种肿瘤细胞当天计至30 d后处死白兔并进行病理取样，甲醛固定、石蜡包埋、切片，HE染色，镜下观察肿瘤组织病理结果。从种植VX2肿瘤组织悬液1周后，对其右侧后腿皮下移植瘤的长径（a）和短径（b）开始进行每周测量，计算瘤体体积（V=a×b2π/6）及瘤体生长率（tumor growth rate，TGR），TGR=[V（第n+1周）/V（第n周）]×100%[5-7]。
1.3?统计学处理
应用SPSS13.0统计软件对数据进行分析，计量资料以（）表示，采用t检验，计数资料采用x2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2?结果
2.1?兔VX2肿瘤组织皮下移植瘤生长率比较
兔VX2肿瘤组织皮下移植瘤模型，在种植VX2肿瘤组织悬液第2周时，从各组实验兔皮下移植瘤生长率结果来看，A组与D组相比未有明显降低，差异无统计学意义（P＞0.05）；当托瑞米芬灌胃治疗第5天后，静脉注射长春瑞滨干预后，实验兔皮下移植瘤生长率结果显示，B组较D组及A组降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；C组的瘤体生长率较各D组及A、B组明显降低，差异有统计学意义（P＜0.01）；第3周应用长春瑞滨第2次干预后，实验兔皮下移植瘤生长率结果可见，C组较D组明显降低，差异有统计学意义（P＜0.01），B组较D组明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），A组与B组实验动物的皮下移植瘤生长率较C组降低，差异无统计学意义（P＞0.05），A组的实验动物皮下移植瘤生长率较D组虽有降低，差异无统计学意义（P＞0.05）；结束4周给药后，各组实验兔皮下移植瘤生长率结果，C组、B组较D组显著下降，差异有统计学意义（均P＜0.01），且分别与A组相比差异有统计学意义（P＜0.05），C组与B组实验兔皮下移植瘤生长率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。A组与D比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。
2.2?兔VX2肿瘤细胞皮下移植瘤模型的形态观察
兔VX2肿瘤细胞皮下移植瘤模型的皮下移植瘤在肉眼可见与皮肤及周围组织粘连并呈结节状，有包膜，瘤结节中央为出血坏死区，有灰白色鱼肉样肿瘤组织在边缘，见图1。肿瘤细胞切片在HE染色光镜下观察呈实体条索样排列，以多边形细胞为主，异型性明显，细胞轻度嗜碱，核-质比例异常，核大，可见较多核分裂象，见图2。
[关键词] 托瑞米芬；长春瑞滨；联合用药；抑制率；凋亡；协同作用
[中图分类号] R73-36+1???[文献标识码] A???[文章编号] 2095-0616（2012）10-29-03
托瑞米芬（toremifene，TOR）是一种非类固醇类三苯乙烯衍生物，适用于绝经后妇女雌激素受体阳性或不详的转移性乳腺癌。长春瑞滨（vinorelbine）抗肿瘤药，用于非小细胞肺癌、乳腺癌以及难治性淋巴瘤、卵巢癌等。据有关研究，托瑞米芬与长春瑞滨联合应用明显抑制兔VX2肿瘤组织皮下移植瘤生长。
托瑞米芬是新一代抗雌激素、抗肿瘤药物，作用机制：药物ER复合物通过托瑞米芬竞争性与乳腺癌细胞浆内的雌激素受体（ER）结合，特异mRNA和蛋白质的合成受雌激素影响，在细胞核内复合物与雌激素依赖基因结合可调节雌激素的诱导作用，进而阻碍细胞的分化和增殖[1-2]。长春瑞滨是一种生物碱类药物，作用机制：药物作用于微管蛋白上并控制细胞分裂终止于中期，主要通过抑制细胞分裂，阻碍其继续分裂形成纺锤体，抑制RNA多聚酶的活力，蛋白质的代谢受到一定程度干扰，阻碍细胞膜类脂质的合成，干扰细胞膜上氨基酸的转运过程，因此癌细胞的分裂繁殖受到抑制，最终癌细胞死亡[3-4]。
1?材料与方法
1.1?材料
选用由延边大学医学部动物科提供的日本大耳白兔32只，雌雄不限，4月龄，体重2.0～2.5 kg；荷VX2鳞癌新西兰大白兔由第四军医大学附属唐都医院介入放射科张洪新副教授惠赠；托瑞米芬（枢瑞，宁波市天衡制药有限公司），40 mg/片；长春瑞滨（盖诺，江苏豪森药业股份有限公司），规格：1 mL：10 mg（以C45H54N4O8计）；PBS缓冲液（武汉博士德）。
1.2?方法
32只健康日本大耳白兔VX2肿瘤细胞的传代建立移植瘤动物模型后按体重随机分为A、B、C、D 4组，每组8只；A组：VX2肿瘤组织皮下移植瘤模型托瑞米芬干预组；B组：VX2肿瘤组织皮下移植瘤模型长春瑞滨干预组；C组：VX2肿瘤组织皮下移植瘤模型长春瑞滨联合托瑞米芬干预组；D组：VX2肿瘤组织皮下移植瘤模型对照组。A组和C组的白兔均给予60 mg/（kg·d）的托瑞米芬灌胃治療，再托瑞米芬灌胃治疗5 d后，对B组及C组白兔给予长春瑞滨静脉注射治疗（第1天与第8天2次2.0 mg/只）。托瑞米芬持续给药至第7天结束，自接种肿瘤细胞当天计至30 d后处死白兔并进行病理取样，甲醛固定、石蜡包埋、切片，HE染色，镜下观察肿瘤组织病理结果。从种植VX2肿瘤组织悬液1周后，对其右侧后腿皮下移植瘤的长径（a）和短径（b）开始进行每周测量，计算瘤体体积（V=a×b2π/6）及瘤体生长率（tumor growth rate，TGR），TGR=[V（第n+1周）/V（第n周）]×100%[5-7]。
1.3?统计学处理
应用SPSS13.0统计软件对数据进行分析，计量资料以（）表示，采用t检验，计数资料采用x2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2?结果
2.1?兔VX2肿瘤组织皮下移植瘤生长率比较
兔VX2肿瘤组织皮下移植瘤模型，在种植VX2肿瘤组织悬液第2周时，从各组实验兔皮下移植瘤生长率结果来看，A组与D组相比未有明显降低，差异无统计学意义（P＞0.05）；当托瑞米芬灌胃治疗第5天后，静脉注射长春瑞滨干预后，实验兔皮下移植瘤生长率结果显示，B组较D组及A组降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；C组的瘤体生长率较各D组及A、B组明显降低，差异有统计学意义（P＜0.01）；第3周应用长春瑞滨第2次干预后，实验兔皮下移植瘤生长率结果可见，C组较D组明显降低，差异有统计学意义（P＜0.01），B组较D组明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），A组与B组实验动物的皮下移植瘤生长率较C组降低，差异无统计学意义（P＞0.05），A组的实验动物皮下移植瘤生长率较D组虽有降低，差异无统计学意义（P＞0.05）；结束4周给药后，各组实验兔皮下移植瘤生长率结果，C组、B组较D组显著下降，差异有统计学意义（均P＜0.01），且分别与A组相比差异有统计学意义（P＜0.05），C组与B组实验兔皮下移植瘤生长率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。A组与D比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。
2.2?兔VX2肿瘤细胞皮下移植瘤模型的形态观察
兔VX2肿瘤细胞皮下移植瘤模型的皮下移植瘤在肉眼可见与皮肤及周围组织粘连并呈结节状，有包膜，瘤结节中央为出血坏死区，有灰白色鱼肉样肿瘤组织在边缘，见图1。肿瘤细胞切片在HE染色光镜下观察呈实体条索样排列，以多边形细胞为主，异型性明显，细胞轻度嗜碱，核-质比例异常，核大，可见较多核分裂象，见图2。