【摘 要】
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目的:探讨应用RNAi技术沉默Beclin1基因对维生素(vitamin K3,VitK3)引起的人肝癌SMMC-7721细胞损伤的影响。方法:应用真核细胞转染技术将Psilencer3.1-siRNA-Beclin1重组质粒
【机 构】
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吉林大学附属第一医院普外科,吉林大学白求恩医学院病理生理教研室
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目的:探讨应用RNAi技术沉默Beclin1基因对维生素(vitamin K3,VitK3)引起的人肝癌SMMC-7721细胞损伤的影响。方法:应用真核细胞转染技术将Psilencer3.1-siRNA-Beclin1重组质粒转入人肝癌SMMC-7721细胞,同时分别设立转染空质粒阴性对照组和转染试剂阴性对照。于48h后收集细胞,分别提取细胞总RNA及总蛋白,通过RT-PCR和Western blotting检测Beclin1基因表达。应用40μmol/LVitK3作用Beclin1-siRNA细胞株,Hoechst33342染色检测细胞凋亡率。结果:与对照组相比,siRNA重组质粒明显降低Beclin1 mRNA水平,抑制其蛋白表达。40μmol/LVitK3作用人肝癌SMMC-7721细胞Beclin1 mRNA表达明显高于对照组,细胞凋亡率增加(P<0.01);而Beclin1-siRNA细胞株,Beclin1 mRNA表达显著低于对照组,与40μmol/LVitK3作用组相比细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论:Psilencer3.1-siRNA-Beclin1转染人肝癌SMMC-7721细胞后,可有效抑制Beclin-1 mRNA和蛋白的表达,抑制VitK3引起的Beclin1依赖性细胞自噬信号通路的激活,促进细胞凋亡。
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