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目的
体外观察不同时间高糖刺激的人肾小球系膜细胞（HGMC）中细胞衰老和自噬的变化，及自噬增强剂西罗莫司和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3MA）对高糖作用的影响。
方法体外培养HGMC，分别给予高糖（30.0 mmol/L葡萄糖）刺激12、24、48、72 h，及以500 nmol/L西罗莫司和2 mmol/L 3MA干预高糖培养72 h。设正常对照组（5.5 mmol/L葡萄糖）和高渗对照组（5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇）。应用光镜观察细胞形态改变，透射电镜观察自噬体形成并计数，β半乳糖苷酶活性染色检测衰老细胞，Western印迹检测自噬相关蛋白LC3、p62及衰老相关蛋白p53、p21的表达。
结果与正常对照组比较，高糖组随着刺激时间延长逐渐表现出细胞体积变大、细胞质区域扁平、多形核及双核细胞增多等一系列细胞衰老表型，高糖刺激72 h时β半乳糖苷酶染色阳性率增加（P<0.05）；高糖刺激48 h和72 h时自噬小体数量均下降，LC3表达下降、p62、p53、p21蛋白表达升高（均P<0.05）。与高糖组比较，西罗莫司干预组LC3表达升高、p62、p53及p21表达下降，β半乳糖苷酶染色阳性率减少（均P<0.05）；而3MA干预组以上效应均无明显改变（均P>0.05）。
结论高糖体外刺激通过抑制自噬活性和激活p53/p21信号通路，可诱导HGMC衰老。西罗莫司增强自噬活性，可以抑制p53/p21通路蛋白表达，减轻衰老。