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[目的]应用RP-HPLC法测定大叶香茶菜中冬凌草甲素的含量。[方法]RP-HPLC法色谱条件：色谱柱为VarianMicrosorb-MV 100-5 C18柱,流动相为甲醇∶水（1∶1）,流速1.0ml/min,检测波长λ=238nm,柱温30℃。[结果]冬凌草甲素加样回收率为98.6%,RSD为2.04%（n=5）;大叶香茶菜叶中冬凌草甲素的含量为4.79g/kg。[结论]该法简便可靠,适用于大叶香茶菜中冬凌草甲素含量测定。