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目的
探索转化生长因子-β3 (TGF-β3)体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞成软骨细胞分化的培养方法,为后续骨性关节炎中软骨细胞再生修复寻找一种可靠的种子细胞。
方法采用全骨髓贴壁法培养SD大鼠股、胫骨骨髓间充质干细胞,并采用流式细胞术鉴定其纯度;用含TGF-β3的成软骨细胞诱导分化培养液对P3代细胞进行诱导分化培养,在不同诱导时间下检测细胞向成软骨细胞的分化能力。
结果原代及传代培养的骨髓间充质干细胞多呈梭形,部分呈三角形,传代后,P3代细胞增殖速度快,呈鱼群样或漩涡样生长;经含TGF-β3的培养基诱导培养后,可见细胞呈多角形和三角形,类似软骨细胞样形态,各细胞有集聚生长现象,细胞增殖能力减弱;免疫荧光化学染色及蛋白印迹法可见细胞有大量colⅡ的荧光表达,阿尔新蓝染色可见细胞及细胞外基质蓝染,第7天和第14天无明显差别;加入Wnt信号阻断剂后,colⅡ蛋白表达明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论TGF-β3能快速地诱导骨髓间充质干细胞成软骨细胞分化,为今后骨髓间充质干细胞移植再生修复关节软骨进而治疗骨性关节炎提供了良好的载体。