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摘要：本综合性实验结合理论课“肝胆疾病的生物化学诊断”章节内容，由学生查阅文献，选择一种急性肝损伤实验模型建立方法，进行实验设计，选择检测指标，确定实验方法，进行课题实施、质量控制、实验数据汇总、撰写论文。本综合性实验的开设和实施既能激发学生对疾病的思考，更好地理解肝胆功能异常和代谢紊乱所致疾病的发病机制，又有助于提高大学生的实验操作技能、创新能力和基本的科研素质，为以后的临床和科研实践打下基础。
关键词：临床生物化学与检验；肝功能；综合性实验；急性肝损伤
中图分类号：G642.0；R2 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2016）09-0240-02
临床生物化学与检验（clinical biochemistry and biochemical test）是用化学和生物化学技术检测人体标本，了解人体生理、病理状态下物质组成和代谢，为临床疾病的预防、诊断、治疗和预后提供依据的学科，其核心是向临床提供准确、有效、及时的检验报告[1]。它是生物化学的重要组成部分，是医学检验专业的主干专业课程，同时也是临床医学专业学生《实验诊断学》课程的重要内容。
肝胆疾病的生物化学诊断是医学检验专业《临床生物化学与检验》的主要内容。肝脏是人体内最大的、功能最多的实质性腺体器官，被喻为人体最大的化工厂。它参与体内消化、代谢、排泄、解毒和免疫等过程，是具有重要而复杂代谢功能的器官。为检查肝脏功能完整性、有无疾病和损伤，从不同角度设计了许多检查肝脏的实验项目，临床上常将肝脏实验室检查统称为肝功能检查。肝功能实验检查的目的是通过某些生物化学指标检测，间接评估肝脏功能，为临床医生正确地做出肝胆疾病诊断、病程检测及疗效观察等提供重要参考信息，可选择的肝功能指标很多，了解每项检查的临床价值，对评价肝脏功能非常重要。
急性肝损伤（acute liver injury）一般由短期接触较大剂量肝毒物或肝脏功能不全时接触某种肝毒物引起，病理改变常见于肝细胞坏死、脂肪变性、胆汁淤积等。多种因素如化学性肝毒物、病毒感染、免疫性因素、乙醇等均可引起急性肝损伤，甚至肝功能衰竭，其防治研究一直是热门课题[2-5]。本次综合性实验主要在医学检验专业本科学生中开设，其主要内容通过建立急性肝损伤模型，选择2～3个反映肝细胞损伤状况的指标进行检测。
一、实验目的
主要包括熟悉文献查阅方法、实验设计和综合报告的撰写格式；熟悉生物材料样品采集和取样原则及一般要求；掌握肝功能检验项目的选择原则、肝胆疾病的临床酶学分类、转氨酶分类及其检测意义；掌握ALT、AST主要测定方法原理、操作步骤、注意事项；初步掌握检测数据统计与分析方法。
二、实验课程基本流程
（一）实验设计
本阶段主要充分利用网络资源，使学生熟悉文献查阅方法。通过查阅文献资料，首先了解目前国内外研究中常用的急性肝损伤模型，选择一种化学物质建立急性肝损伤模型，确定染毒剂量、方式、生物标本的采集时间；确定实验动物、性别、年龄及组别；列出所需试剂与器材清单；样品预处理方法；检测指标、检测方法的选择；实验结果的统计与处理以及论文撰写。最终以论文开题的形式在班级展示，并由专业课老师给予点评和指导，提交一份开题报告。
（二）课题实施
此部分为本次综合性实验的主体部分，包括动物的选择、染毒、生物样品的采集、预处理、分析检测、数据的统计分析、论文撰写等。在这个阶段，要求学生需要熟悉或掌握的知识点较多。比如：理论部分要求掌握：（1）肝功能检验项目的选择原则；（2）肝胆疾病的临床酶学分类；（3）转氨酶分类及其检测意义；（4）ALT、AST主要测定方法；（5）连续监测法及赖氏法测定ALT、AST的原理、注意事项。操作部分：（1）试剂的称量与配制；（2）实验动物的抓取方法、编号标记、分组原则；（3）实验动物的染毒技术、生物样品的采集、预处理；（4）赖氏法测定ALT、AST的操作步骤；（5）数据的处理、统计分析以及论文撰写等。
（三）数据分析和撰写报告
一个完整的临床生物化学检验过程，包括样品采集、样品预处理、分析测定、数据处理和撰写报告五个步骤。在此过程中，每个步骤均可能产生实验误差，如所选取的样品是否具有代表性、样品预处理方法选择是否合适、分析方法及仪器和器皿、化学试剂和实验用水等，还包括检验人员的技术水平和实验环境。为了保证实验室提供的分析数据准确可靠，首先必须对上述各方面实施严格的质量管理措施，尽量减小和避免实验误差；其次要求同学们掌握生化检测数据（特别是组间数据）的表示方式；在统计分析时，要求掌握两组或多组间数据的比较方法，正确应用三线表；最后，熟悉科研论文的书写格式，以小论文的形式把此次综合性实验的结果展示出来。
三、考核方式
本实验采取分组教学，为最大限度调动同学们的积极性及团队协作精神，保证每一位同学都能动手操作，安排2～3人一个小组，各组可选择不同的急性肝损伤模型。
（一）考核方式及要求
1.开题报告。可以包括以下内容：
（1）背景：急性肝损伤简介，常见的引起肝损伤的化学物质，目前急性肝损伤常用的动物模型有哪些？可以采用哪些指标来评价急性肝损伤？
（2）实验设计：根据文献，选择一种化学物质建立肝损伤模型，并对相应的检测指标进行检测；介绍所选择的检测指标、检验意义、检测原理、操作步骤及注意事项。
（3）实验过程中的质量控制、实验结果的统计与分析、经费预算等。
2.以实验小组为单位进行综合技能考核。要求标准曲线线性符合要求，成功建立急性肝损伤模型。
3.每组以小论文的形式提交一份实验报告。报告的基本内容包括：研究现状及意义、实验动物选择、材料与方法、结果分析、讨论、参考文献等。论文撰写要求格式准确、条理清晰、内容真实。 （二）成绩评定
实验设计书写占总成绩的20%，实验操作与技能考核占50%，科研论文占30%。
四、讨论
目前医学院校本科生开设的实验教学多为验证性实验，学生只参与完成整个实验的一小部分，缺乏自主设计的综合性实验，不能体现创新性[6]。因而，开设“设计性综合实验”不仅可以强化学生对多种实验技能的掌握，还能够调动学生的组织协作能力、求知欲和探索精神。
临床生物化学检验是一个连续的过程，包括标本的采集、运送、确认、处理、分析检测、数据的处理、检验结果的审核、检验结果报告及结果解释等[7]。为使学生更好地理解理论知识并联系临床应用，同时提高学生学习的兴趣，将临床生化检测实验设计成相对连续完整的从肝损伤模型建立到生化指标检测的综合设计性实验，使学生能够观察疾病的发生发展，在实践中激发对疾病发病机制的思考。
建立疾病动物模型是研究疾病发生发展规律及开展防治研究的常用方法。相对肥胖大鼠血糖血脂的检测综合性实验而言，建立急性肝损伤模型的技术比较成熟、实验周期短、易操作，并且重复性也较好。本实验课程从查阅文献、课题设计、模型建立、取材及检测再到数据分析及论文撰写，通过整个流程即强化了学生对临床生化多种实验技能的掌握，又培养了学生独立动手能力、善于发现问题的能力及处理实验数据、分析实验结果的能力。我系自在检验医学系本课学生开展急性肝损伤综合性实验以来，带领学生对各种经典的肝损伤模型（比如四氯化碳、对乙酰氨基酚、异烟肼等）进行了验证，此外，积极开展重金属导致的急性肝损伤模型研究，并鼓励其总结部分研究结果写成科研论文发表，极大地调动了学生的积极性，对开展科学研究的思路也有了一个基本的认识，为以后的临床和科研实践打下基础。
如前所述，临床生物化学和生物化学检验是一门高度综合性的应用科学，课程涉及多学科理论，课程的实践性、应用性强，对学生的实践性和操作性要求强。因此，在开展实验过程中也遇到一些问题：比如，在开始综合性实验之前，要求学生需要有一定的基础知识和数据分析能力。而学生的知识储备、实验基础技能均比较薄弱，在文献查找、阅读、实验设计、实验操作及数据分析与统计上均存在很多不足，因此实验不能太复杂，此外要合理安排综合性实验教学时间（灵活、机动，不能与考试时间相冲突），确保实验顺利进行。
参考文献：
[1]徐克前，王晓春，罗建新，等.临床生物化学与检验教育史话[J].生命的化学，2014，34（2）：225-231.
[2]陶莉，陈熙，张程，等.内质网应激在四氯化碳致急性肝损伤中的作用[J].中国药理学通报，2013，29（11）：1536-1540.
[3]梁英丽，章叶发，张程，等.褪黑素减轻对乙酰氨基酚的急性肝脏毒性[J].安徽医科大学学报，2013，48（2）：138-141.
[4]刘晓倩，张志辉，张程，等.单次乙醇暴露对小鼠肝脏甘油三酯合成的影响[J].安徽医科大学学报，2013，48（4）：372-374.
[5]石嫦娥，陈熙，张程，等.SREBP-1c激活在细菌脂多糖引起小鼠肝脏脂质沉积中的作用[J].安徽医科大学学报，2011，46（12）：1227-1230.
[6]陈道俊，操基玉.高校《环境卫生学》“设计性综合实验”的建立与思考[J].中华疾病控制杂志，2011，（15）3：254-255.
[7]张捷，杨硕.临床生物化学检验的回顾与展望，中华检验医学杂志[J].2013，36（1）：22-24.
关键词：临床生物化学与检验；肝功能；综合性实验；急性肝损伤
中图分类号：G642.0；R2 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2016）09-0240-02
临床生物化学与检验（clinical biochemistry and biochemical test）是用化学和生物化学技术检测人体标本，了解人体生理、病理状态下物质组成和代谢，为临床疾病的预防、诊断、治疗和预后提供依据的学科，其核心是向临床提供准确、有效、及时的检验报告[1]。它是生物化学的重要组成部分，是医学检验专业的主干专业课程，同时也是临床医学专业学生《实验诊断学》课程的重要内容。
肝胆疾病的生物化学诊断是医学检验专业《临床生物化学与检验》的主要内容。肝脏是人体内最大的、功能最多的实质性腺体器官，被喻为人体最大的化工厂。它参与体内消化、代谢、排泄、解毒和免疫等过程，是具有重要而复杂代谢功能的器官。为检查肝脏功能完整性、有无疾病和损伤，从不同角度设计了许多检查肝脏的实验项目，临床上常将肝脏实验室检查统称为肝功能检查。肝功能实验检查的目的是通过某些生物化学指标检测，间接评估肝脏功能，为临床医生正确地做出肝胆疾病诊断、病程检测及疗效观察等提供重要参考信息，可选择的肝功能指标很多，了解每项检查的临床价值，对评价肝脏功能非常重要。
急性肝损伤（acute liver injury）一般由短期接触较大剂量肝毒物或肝脏功能不全时接触某种肝毒物引起，病理改变常见于肝细胞坏死、脂肪变性、胆汁淤积等。多种因素如化学性肝毒物、病毒感染、免疫性因素、乙醇等均可引起急性肝损伤，甚至肝功能衰竭，其防治研究一直是热门课题[2-5]。本次综合性实验主要在医学检验专业本科学生中开设，其主要内容通过建立急性肝损伤模型，选择2～3个反映肝细胞损伤状况的指标进行检测。
一、实验目的
主要包括熟悉文献查阅方法、实验设计和综合报告的撰写格式；熟悉生物材料样品采集和取样原则及一般要求；掌握肝功能检验项目的选择原则、肝胆疾病的临床酶学分类、转氨酶分类及其检测意义；掌握ALT、AST主要测定方法原理、操作步骤、注意事项；初步掌握检测数据统计与分析方法。
二、实验课程基本流程
（一）实验设计
本阶段主要充分利用网络资源，使学生熟悉文献查阅方法。通过查阅文献资料，首先了解目前国内外研究中常用的急性肝损伤模型，选择一种化学物质建立急性肝损伤模型，确定染毒剂量、方式、生物标本的采集时间；确定实验动物、性别、年龄及组别；列出所需试剂与器材清单；样品预处理方法；检测指标、检测方法的选择；实验结果的统计与处理以及论文撰写。最终以论文开题的形式在班级展示，并由专业课老师给予点评和指导，提交一份开题报告。
（二）课题实施
此部分为本次综合性实验的主体部分，包括动物的选择、染毒、生物样品的采集、预处理、分析检测、数据的统计分析、论文撰写等。在这个阶段，要求学生需要熟悉或掌握的知识点较多。比如：理论部分要求掌握：（1）肝功能检验项目的选择原则；（2）肝胆疾病的临床酶学分类；（3）转氨酶分类及其检测意义；（4）ALT、AST主要测定方法；（5）连续监测法及赖氏法测定ALT、AST的原理、注意事项。操作部分：（1）试剂的称量与配制；（2）实验动物的抓取方法、编号标记、分组原则；（3）实验动物的染毒技术、生物样品的采集、预处理；（4）赖氏法测定ALT、AST的操作步骤；（5）数据的处理、统计分析以及论文撰写等。
（三）数据分析和撰写报告
一个完整的临床生物化学检验过程，包括样品采集、样品预处理、分析测定、数据处理和撰写报告五个步骤。在此过程中，每个步骤均可能产生实验误差，如所选取的样品是否具有代表性、样品预处理方法选择是否合适、分析方法及仪器和器皿、化学试剂和实验用水等，还包括检验人员的技术水平和实验环境。为了保证实验室提供的分析数据准确可靠，首先必须对上述各方面实施严格的质量管理措施，尽量减小和避免实验误差；其次要求同学们掌握生化检测数据（特别是组间数据）的表示方式；在统计分析时，要求掌握两组或多组间数据的比较方法，正确应用三线表；最后，熟悉科研论文的书写格式，以小论文的形式把此次综合性实验的结果展示出来。
三、考核方式
本实验采取分组教学，为最大限度调动同学们的积极性及团队协作精神，保证每一位同学都能动手操作，安排2～3人一个小组，各组可选择不同的急性肝损伤模型。
（一）考核方式及要求
1.开题报告。可以包括以下内容：
（1）背景：急性肝损伤简介，常见的引起肝损伤的化学物质，目前急性肝损伤常用的动物模型有哪些？可以采用哪些指标来评价急性肝损伤？
（2）实验设计：根据文献，选择一种化学物质建立肝损伤模型，并对相应的检测指标进行检测；介绍所选择的检测指标、检验意义、检测原理、操作步骤及注意事项。
（3）实验过程中的质量控制、实验结果的统计与分析、经费预算等。
2.以实验小组为单位进行综合技能考核。要求标准曲线线性符合要求，成功建立急性肝损伤模型。
3.每组以小论文的形式提交一份实验报告。报告的基本内容包括：研究现状及意义、实验动物选择、材料与方法、结果分析、讨论、参考文献等。论文撰写要求格式准确、条理清晰、内容真实。 （二）成绩评定
实验设计书写占总成绩的20%，实验操作与技能考核占50%，科研论文占30%。
四、讨论
目前医学院校本科生开设的实验教学多为验证性实验，学生只参与完成整个实验的一小部分，缺乏自主设计的综合性实验，不能体现创新性[6]。因而，开设“设计性综合实验”不仅可以强化学生对多种实验技能的掌握，还能够调动学生的组织协作能力、求知欲和探索精神。
临床生物化学检验是一个连续的过程，包括标本的采集、运送、确认、处理、分析检测、数据的处理、检验结果的审核、检验结果报告及结果解释等[7]。为使学生更好地理解理论知识并联系临床应用，同时提高学生学习的兴趣，将临床生化检测实验设计成相对连续完整的从肝损伤模型建立到生化指标检测的综合设计性实验，使学生能够观察疾病的发生发展，在实践中激发对疾病发病机制的思考。
建立疾病动物模型是研究疾病发生发展规律及开展防治研究的常用方法。相对肥胖大鼠血糖血脂的检测综合性实验而言，建立急性肝损伤模型的技术比较成熟、实验周期短、易操作，并且重复性也较好。本实验课程从查阅文献、课题设计、模型建立、取材及检测再到数据分析及论文撰写，通过整个流程即强化了学生对临床生化多种实验技能的掌握，又培养了学生独立动手能力、善于发现问题的能力及处理实验数据、分析实验结果的能力。我系自在检验医学系本课学生开展急性肝损伤综合性实验以来，带领学生对各种经典的肝损伤模型（比如四氯化碳、对乙酰氨基酚、异烟肼等）进行了验证，此外，积极开展重金属导致的急性肝损伤模型研究，并鼓励其总结部分研究结果写成科研论文发表，极大地调动了学生的积极性，对开展科学研究的思路也有了一个基本的认识，为以后的临床和科研实践打下基础。
如前所述，临床生物化学和生物化学检验是一门高度综合性的应用科学，课程涉及多学科理论，课程的实践性、应用性强，对学生的实践性和操作性要求强。因此，在开展实验过程中也遇到一些问题：比如，在开始综合性实验之前，要求学生需要有一定的基础知识和数据分析能力。而学生的知识储备、实验基础技能均比较薄弱，在文献查找、阅读、实验设计、实验操作及数据分析与统计上均存在很多不足，因此实验不能太复杂，此外要合理安排综合性实验教学时间（灵活、机动，不能与考试时间相冲突），确保实验顺利进行。
参考文献：
[1]徐克前，王晓春，罗建新，等.临床生物化学与检验教育史话[J].生命的化学，2014，34（2）：225-231.
[2]陶莉，陈熙，张程，等.内质网应激在四氯化碳致急性肝损伤中的作用[J].中国药理学通报，2013，29（11）：1536-1540.
[3]梁英丽，章叶发，张程，等.褪黑素减轻对乙酰氨基酚的急性肝脏毒性[J].安徽医科大学学报，2013，48（2）：138-141.
[4]刘晓倩，张志辉，张程，等.单次乙醇暴露对小鼠肝脏甘油三酯合成的影响[J].安徽医科大学学报，2013，48（4）：372-374.
[5]石嫦娥，陈熙，张程，等.SREBP-1c激活在细菌脂多糖引起小鼠肝脏脂质沉积中的作用[J].安徽医科大学学报，2011，46（12）：1227-1230.
[6]陈道俊，操基玉.高校《环境卫生学》“设计性综合实验”的建立与思考[J].中华疾病控制杂志，2011，（15）3：254-255.
[7]张捷，杨硕.临床生物化学检验的回顾与展望，中华检验医学杂志[J].2013，36（1）：22-24.